| 非洲猪瘟病毒p54抗原C端的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定 |
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| 引用本文： | 冯春燕,王彩霞,杜方原,张永宁,刘丹丹,林祥梅,吴绍强. 非洲猪瘟病毒p54抗原C端的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定[J]. 动物医学进展, 2019, 40(6): 1-5 |
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| 作者姓名： | 冯春燕 王彩霞 杜方原 张永宁 刘丹丹 林祥梅 吴绍强 |
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| 作者单位： | 中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所,北京,100176;中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所,北京,100176;中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所,北京,100176;中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所,北京,100176;中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所,北京,100176;中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所,北京,100176;中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所,北京,100176 |
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| 摘 要： | 利用大肠埃希菌表达非洲猪瘟病毒核心抗原p54蛋白C末端55个氨基酸的肽段(命名为p54-2),制备了多克隆抗体并进行了纯化,以进一步用于非洲猪瘟ELISA试剂盒的研发。将PCR扩增获得的p54-2目的片段与表达载体pGEX6p-1质粒均经过限制性内切BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,构建pGEX6p-1-ASFV-P54-2原核表达质粒。将该质粒转化到大肠埃希菌BL21中,诱导蛋白大量表达,并纯化获得高纯度的蛋白。将纯化的p54-2蛋白免疫小鼠,获得p54-2多克隆抗体并进一步纯化多抗。用ELISA、Westernblot对纯化的多克隆抗体进行效价滴定及特异性鉴定。结果显示,成功构建了pGEX6p-1-ASFV-P54-2重组质粒,在大肠埃希菌中IPTG诱导下,能够高效表达重组p54-2蛋白。用p54-2蛋白免疫Balb/c小鼠获得的多克隆抗体经ELISA检测其抗体效价为1∶128000,说明该蛋白有很好的免疫原性。Westernblot结果显示,制备的多克隆抗体能特异性识别非洲猪瘟病毒p54胞内区,具有较高反应性和特异性,可以用于ELISA检测方法研究和p54抗原表位的鉴定。
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| 关 键 词： | 非洲猪瘟病毒 p54抗原 多克隆抗体 酶联免疫吸附试验 |
Prokaryotic Expression of C-terminus of p54 Antigen of African Swine Fever Virus and Characterization of Its Polyclonal Antibodies |
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| FENG Chun-yan,WANG Cai-xia,Du Fang-yuan,ZHAN Yong-ning,Liu Dan-dan,LIN Xiang-mei,WU Shao-qiang. Prokaryotic Expression of C-terminus of p54 Antigen of African Swine Fever Virus and Characterization of Its Polyclonal Antibodies[J]. Progress In Veterinary Medicine, 2019, 40(6): 1-5 |
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| Authors: | FENG Chun-yan WANG Cai-xia Du Fang-yuan ZHAN Yong-ning Liu Dan-dan LIN Xiang-mei WU Shao-qiang |
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| Affiliation: | (Institute of Animal Quarantine,Chinese Academy of Inspection and Quarantine,Beijing,100176,China) |
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| Abstract: | FENG Chun-yan;WANG Cai-xia;Du Fang-yuan;ZHAN Yong-ning;Liu Dan-dan;LIN Xiang-mei;WU Shao-qiang(Institute of Animal Quarantine,Chinese Academy of Inspection and Quarantine,Beijing,100176,China) |
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| Keywords: | African swine fever p54 protein polyclonal antibody ELISA |
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