绵羊肺炎支原体环介导等温扩增联合横向流动 试纸条可视化检测方法的建立 |
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引用本文: | 张洁,曹军军,祝明松,杨亚军,吴文星,王璐,石峰.绵羊肺炎支原体环介导等温扩增联合横向流动 试纸条可视化检测方法的建立[J].动物医学进展,2019,40(3). |
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作者姓名: | 张洁 曹军军 祝明松 杨亚军 吴文星 王璐 石峰 |
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作者单位: | 石河子大学 生命科学学院,新疆石河子,832000;石河子大学 动物科技学院,新疆石河子,832000;杭州毕肯莱博生物技术有限公司,浙江杭州,310000 |
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摘 要: | 为建立绵羊肺炎支原体快速检测方法,用环介导等温扩增(LAMP)技术进行核酸扩增,通过横向流动试纸条(LFD)实现可视化检测。针对绵羊肺炎支原体HSP 70基因设计一套特异性引物,其中HSP70FIP由生物素标记进行LAMP扩增反应,产物与生物素标记的探针杂交后,在LFD上完成检测,建立了绵羊肺炎支原体LAMP-LFD快速检测方法,并对其特异性、敏感性及临床应用进行检测。结果表明,LAMP在62℃反应70min,即可特异性的检测绵羊肺炎支原体的存在,最低检测线为1.0×102 CFU/mL,灵敏度是常规PCR检测方法的100倍,且对已知感染绵羊肺炎支原体的羊病变肺组织临床样品的检出率为100%。建立的LAMP-LFD检测绵羊肺炎支原体的方法特异性强、灵敏度高并且操作简便,为羊感染绵羊肺炎支原体的预防和诊断提供了新方法。
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关 键 词: | 绵羊肺炎支原体 HSP70基因 环介导等温扩增技术 横向流动试纸条 检测 |
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