| 水貂阿留申病毒的微滴式数字PCR方法的建立及初步应用 |
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| 引用本文： | 蔡晓庆,姜世金,张金叶,孙圣福,王贵升.水貂阿留申病毒的微滴式数字PCR方法的建立及初步应用[J].中国预防兽医学报,2024(2):164-170. |
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| 作者姓名： | 蔡晓庆 姜世金 张金叶 孙圣福 王贵升 |
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| 作者单位： | 1. 山东省动物疫病与预防控制中心;2. 山东农业大学;3. 北京市华都峪口禽业有限责任公司;4. 潍坊市动物疫病预防控制中心 |
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| 摘 要： | 为建立水貂阿留申病毒(AMDV)微滴式数字PCR (ddPCR)检测方法，本研究根据AMDV VP2基因的保守区设计特异性引物和探针，通过PCR扩增AMDV VP2基因并克隆至p MD19-T载体，构建重组质粒p MD19-T-AMDV，并经PCR和测序鉴定后利用该质粒标准品作为模板，通过各反应条件的优化，初步建立了检测AMDV的ddPCR方法。分别以AMDV、水貂肠炎细小病毒、犬瘟热病毒、犬细小病毒、水貂流感病毒基因组为模板，按照本研究建立的ddPCR方法检测，评估其特异性；将1.43×107拷贝/μL～1.43×100拷贝/μL的重组质粒标准品作为模板，采用优化后的ddPCR和文献中的荧光定量PCR (qPCR)检测，评估该方法的敏感性；分别以不同浓度的重组质粒标准品作为模板，采用优化后的ddPCR分别进行批内和批间重复性试验，以变异系数(CV)评估该方法的重复性。优化结果显示，该方法的最佳引物终浓度为400 nmol/L (1.2μL)、探针终浓度为200 nmol/L (0.6μL)、退火温度为60℃。特异性试验结果显示，该方法仅可检...
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| 关 键 词： | 微滴式数字PCR 检测 水貂阿留申病毒 |
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