| A型流感病毒PB2蛋白帽子结合结构域的原核表达与鉴定 |
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| 引用本文： | 林维鹏,崔鹏飞,王思文,邓国华,陈化兰.A型流感病毒PB2蛋白帽子结合结构域的原核表达与鉴定[J].中国预防兽医学报,2024(2):107-112+139. |
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| 作者姓名： | 林维鹏 崔鹏飞 王思文 邓国华 陈化兰 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室 |
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| 基金项目： | 十四五国家重点研发计划(2021YFD1800200)； |
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| 摘 要： | A型流感病毒是一种重要的人畜共患病病原，严重威胁全球公共卫生安全。PB2蛋白的帽子结合结构域(CBD)在流感病毒的转录过程中发挥重要功能，是抗流感病毒药物的重要靶点之一。为获得高纯度原核表达的A型流感病毒的CBD蛋白，本研究利用同源重组策略将8×His标签与一株H5N1亚型高致病性禽流感病毒的CBD区基因序列克隆至原核表达载体pET28a中，构建重组质粒pET28a-8×His-CBD，经PCR及测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，经不同浓度IPTG诱导不同时间后，经SDS-PAGE检测蛋白表达后使用镍柱纯化。结果显示，菌体裂解上清中在21 ku处可见目的条带，与8×His-CBD蛋白预期大小符合，且以0.5 mmol/L IPTG于37℃诱导6 h时蛋白表达量最高，镍柱纯化后可获得纯度大于95%的8×His-CBD蛋白。为确定该蛋白是否具有生物学活性，本研究以帽子结构类似物m7GTP对其进行等温滴定量热试验，结果显示8×His-CBD蛋白和m7GTP结合时存在明显热峰，表明8×His-CBD蛋白具有生物学活性；经计算，其Kd值为1.71×10...
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| 关 键 词： | A型流感病毒 PB2蛋白 帽子结合结构域 原核表达 纯化 |
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