陆川猪GPR1基因真核表达载体构建及组织表达谱分析 |
| |
引用本文: | 谢婉,何剑雄,夏攀洁,吴延军,焦迪,陈宝剑,关志惠,兰干球,郭亚芬,谢炳坤.陆川猪GPR1基因真核表达载体构建及组织表达谱分析[J].中国畜牧兽医,2018(8). |
| |
作者姓名: | 谢婉 何剑雄 夏攀洁 吴延军 焦迪 陈宝剑 关志惠 兰干球 郭亚芬 谢炳坤 |
| |
作者单位: | 广西大学动物科学技术学院;广西壮族自治区畜牧研究所广西家畜遗传改良重点实验室 |
| |
摘 要: | 试验旨在构建陆川猪G蛋白偶联受体1(G protein-coupled receptor 1,GPR1)基因真核表达载体,并对其组织表达谱进行分析。采用RT-PCR技术从10周龄陆川猪皮下脂肪组织中扩增出GPR1基因CDS区后,使用常规分子克隆手段构建含GPR1基因片段的真核表达载体pEGFP-N1-GPR1,利用双酶切和测序对重组质粒pEGFPN1-GPR1进行鉴定,并以脂质体法将重组质粒转染3T3-L1细胞24h后观察细胞荧光表达情况。收集所转染3T3-L1细胞并提取其总RNA,实时荧光定量PCR进一步检测GPR1真核表达载体表达情况;提取6头10周龄陆川猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、皮下脂肪总RNA,实时荧光定量PCR检测GPR1基因mRNA在陆川猪各组织中的表达量。结果表明,陆川猪GPR1基因CDS全长1 068bp,成功将其连接至pEGFP-N1真核表达载体,重组表达载体pEGFP-N1-GPR1质粒和空载pEGFP-N1质粒所转染3T3-L1细胞均能表现出绿色荧光,且空白对照组并未表现出绿色荧光。实时荧光定量PCR结果证实,GPR1基因在重组质粒试验组的表达量极显著高于空载质粒组(P0.01)。GPR1基因在10周龄陆川猪肝脏中表达量最高,在心脏、脾脏、肺脏、肾脏、皮下脂肪中均有表达,在背最长肌中几乎不表达。本试验成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-GPR1,并获得了GPR1基因组织表达谱,为进一步研究GPR1基因对陆川猪脂肪沉积的影响提供参考。
|
本文献已被 CNKI 等数据库收录! |
|