| 布氏杆菌和结核杆菌二重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用 |
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| 引用本文： | 孟茹,陈创夫,张辉,乔军,任艳,王正荣,蒋松.布氏杆菌和结核杆菌二重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用[J].畜牧兽医学报,2010,41(8). |
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| 作者姓名： | 孟茹 陈创夫 张辉 乔军 任艳 王正荣 蒋松 |
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| 作者单位： | 石河子大学动物科技学院,石河子,832003 |
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| 基金项目： | 国际合作重点项目，国家自然科学基金 |
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| 摘 要： | 本试验旨在利用二重实时荧光定量PCR技术建立鉴别诊断布氏杆菌和结核杆菌的方法。通过筛选布氏杆菌omp10、omp19、omp17、omp25、omp31和结核杆菌cfp10基因的最佳引物组合,建立二重实时定量PCR鉴别诊断方法,对该方法进行稳定性、特异性和敏感性试验,并对临床样品及模拟样品进行检测。经筛选布氏杆菌的omp25基因与结核杆菌cfp10基因引物组合最佳,该二重实时荧光定量PCR方法中布氏杆菌Tm值为88～89℃,结核杆菌Tm值为90～91℃,对其他供试的菌株则为阴性;该方法对布氏杆菌的DNA最低检出量为20拷贝.μL-1,结核杆菌为50拷贝.μL-1,两病原都存在时为100拷贝.μL-1,比常规PCR高100倍。利用所建立的二重荧光定量PCR方法及常规PCR,对24份结核痰样、11份布氏杆菌基因粗提物及30份模拟奶样进行检测,符合率为100%。本试验建立的方法可用于同时检测布氏杆菌和结核杆菌,并且具有良好的特异性、敏感性和稳定性。
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| 关 键 词： | 布氏杆菌 结核杆菌 二重实时荧光定量PCR |
Establishment and Initial Utilization of a Duplex Real-time Fluorescence Quantitative PCR Assay for Detecting Brucella and Mycobacterium tuberculos |
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| MENG Ru,CHEN Chuang-fu,ZHANG Hui,QIAO Jun,REN Yan,WANG Zheng-rong,JIANG Song.Establishment and Initial Utilization of a Duplex Real-time Fluorescence Quantitative PCR Assay for Detecting Brucella and Mycobacterium tuberculos[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2010,41(8). |
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| Authors: | MENG Ru CHEN Chuang-fu ZHANG Hui QIAO Jun REN Yan WANG Zheng-rong JIANG Song |
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