牛生长激素基因工程茵的构建及其诱导表达

为获得牛生长激素（BST）蛋白，构建了工程菌并进行了诱导表达．先设计2对引物，从pUCm—T-BST克隆中扩增出BST成熟蛋白编码序列，双酶切后分别插入表达载体（pET30a和pET29a），转化E．coli DH5a并进行阳性克隆鉴定；再将重组质粒分别转化到E．coli BL21（DE3）和RosettaTM（DE3）pLysS中，构建BST原核工程菌；最后进行诱导表达．结果表明，重组表达载体pET30a—BST和pET29a—BST中均插入了正确的目的基因；经IPTG诱导后，以BL21（DE3）为宿主的工程菌无目的蛋白表达，而pET30a—BST／Rosetta^TM和pET29a．BST／Rosetta^TM分别可见分子量约29．5，26．5kD的融合蛋白表达，约占菌体蛋白的26％，35％．说明稀有密码子限制BST基因在E．coli中的表达。选择适宜的宿主菌可克服此障碍．