| 利用CRISPR/Cas9n系统编辑绵羊成纤维细胞生长因子5(FGF5)基因 |
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| 引用本文： | 蒙亚琦,姚旭东,任秀美奥,郭延华,唐红,张译元,王立民,周平.利用CRISPR/Cas9n系统编辑绵羊成纤维细胞生长因子5(FGF5)基因[J].畜牧与兽医,2022(1). |
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| 作者姓名： | 蒙亚琦 姚旭东 任秀美奥 郭延华 唐红 张译元 王立民 周平 |
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| 作者单位： | 石河子大学动物科技学院;省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院 |
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| 基金项目： | 转基因生物新品种培育重大专项(2016ZX08008001);省部共建绵羊遗传改良与健康养殖重点实验室(2013KLS05);国家自然科学基金(31660341)。 |
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| 摘 要： | 成纤维细胞生长因子5(FGF5)是影响毛囊周期性活动及毛发生长的重要生长因子。本研究利用CRISPR/Cas9n系统靶向编辑绵羊成纤维细胞中FGF5基因。首先利用Gibson Assembly法将U6启动子引导表达单导向RNA(sgRNA)的原件构建至pX461质粒中,获得pX461-U6质粒;再将设计并合成好的1对靶向FGF5基因第3外显子的sgRNA及其互补链,经退火连接形成sgRNA-sg1和sgRNA-sg2双链后,分别克隆至带有BbsⅠ和BsaⅠ黏性末端的pX461-U6质粒。构建好的重组质粒pX461-U6-sg1+sg2经测序鉴定后,以电转染的方式转入绵羊成纤维细胞,72 h后收集细胞进行检测分析。经T7E1酶切检测分析表明,成功获得1对具有靶向效果的sgRNA,PCR扩增的FGF5基因片段经TA克隆后进行测序鉴定,结果sgRNA-sg1+sg2在靶位点的打靶效率为100%;缺失的核苷酸数从10到64个不等;基于预测的3D模型和RT-PCR结果显示,FGF5基因的突变将会影响FGF5蛋白与其受体的结合,导致FGF5蛋白失去其生物学功能。本研究构建了可以在同一载体中同时表达2条sgRNA和Cas9n以及绿色荧光蛋白(GFP)的质粒,瞬时转染至绵羊成纤维细胞后,成功获得了高效靶向绵羊FGF5基因的sgRNA位点,为精确和高效的靶向基因工程提供了科学依据。
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| 关 键 词： | 绵羊 成纤维细胞生长因子5 CRISPR/Cas9n 基因敲除 |
Editing the FGF5 gene in the fibroblasts of ovis aries using the CRISPR/Cas9n system |
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| MENG Yaqi,YAO Xudong,REN Xiumeiao,GUO Yanhua,TANG Hong,ZHANG Yiyuan,WANG Liming,ZHOU Ping.Editing the FGF5 gene in the fibroblasts of ovis aries using the CRISPR/Cas9n system[J].Animal Husbandry & Veterinary Medicine,2022(1). |
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| Authors: | MENG Yaqi YAO Xudong REN Xiumeiao GUO Yanhua TANG Hong ZHANG Yiyuan WANG Liming ZHOU Ping |
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| Institution: | (College of Animal Science and Technology,Shihezi University,Shihezi 832000,China;State Key Laboratory of Sheep Genetic Improvement and Healthy Production,Xinjiang Academy of Agricultural and Reclamation Sciences,Shihezi 832000,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | sheep fibroblast growth factor 5 CRISPR/Cas9n knock-out |
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