家禽MSTN基因转录子的克隆及真核表达

为了确定家禽中MSTN基因转录子的种类、序列及表达差异,对1日龄海兰鸡、白羽鸡和寿光鸡腿肌MSTN基因进行RT-PCR扩增、TA克隆、测序及SDS-PAGE分析。结果表明,海兰鸡、白羽鸡和寿光鸡鸡腿肌中均存在3种不同大小的MSTN cDNA;cMSTN-1由1 128 bp组成,海兰鸡与白羽鸡的cMSTN的序列相同,寿光鸡在第1 115碱基处由G变为A;cMSTN-2由985 bp组成,缺失了cMSTN-1的374～517 bp处序列;海兰鸡和白羽鸡的cMSTN-2与寿光鸡的cMSTN-2相比,均有5处碱基不同,而海兰鸡和白羽鸡只存在2处碱基不同;cMSTN-2在388～390 bp处出现UAA终止密码子;cMSTN-3由754 bp组成,缺失了374～748处的374个核苷酸,在上述三种家禽中cMSTN-3序列相同。转染成纤维细胞48 h后,pEGFP-N1-cMSTN-2表达蛋白质分子质量约为15 ku,而pEGFP-N1-cMSTN-3不表达。这是首次发现三个品种的鸡体内同时存在三种不同大小的MSTN基因转录子,该结果可为进一步确定MSTN基因的作用机理提供试验依据。