| 美洲鳗鲡腺瘤病毒(AEAdoV)普通PCR和SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 孔文迪,陈曦,杨金先,葛均青.美洲鳗鲡腺瘤病毒(AEAdoV)普通PCR和SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J].水产学报,2024,48(4). |
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| 作者姓名： | 孔文迪 陈曦 杨金先 葛均青 |
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| 作者单位： | 福建省农业科学院生物技术研究所,福建省农业科学院生物技术研究所,福建省农业科学院生物技术研究所,福建省农业科学院生物技术研究所 |
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| 摘 要： | 为了建立美洲鳗鲡腺瘤病毒（American Eel Adomavirus, AEAdoV）的检测方法，根据AEAdoV福建株的superfamily 3 helicases (S3H)序列，设计了二对引物，建立了AEAdoV的普通PCR和qPCR检测方法；进一步评价检测方法的灵敏性、特异性及重复性，比较两种方法对AEAdoV-FJ检出率，并对美洲鳗鲡体内各组织的病毒含量进行了分析。结果显示，普通PCR扩增的目的片段长度约300bp，利用其构建了qPCR质粒标准品，其拷贝数与qPCR的阈值循环数(cycle threshold value，CT)线性关系良好，线性范围广，标准曲线相关系数(R2)达到0.999，扩增效率为105.067％；采用普通PCR法和qPCR可检测的最低AEAdoV拷贝数分别为100个和10个；上述两种方法均可特异性检测AEAdoV，而对蛙虹彩病毒（Rana grylio virus，RGV）、鳗鲡疱疹病毒（Anguillid herpesvirus，AngHV）、鲤疱疹病毒（Koi herpes virus，KHV）、对虾白斑综合症病毒（White spot syndrome virus，WSSV）、日本鳗鲡内皮细胞坏死病毒(Japanese Eel Adomavirus，JEAdoV)和花鳗鲡腺瘤病毒(Marbled Eel Adomavirus, MeAdoV)均无扩增反应；qPCR法的组内和组间变异系数均小于2%，表明其重复性良好。临床应用结果显示，35 份美洲鳗鲡病料，采用普通PCR法的AEAdoV检出率为82.8%，而qPCR法的AEAdoV检出率为97%。对美洲鳗鲡组织的病毒含量分析结果显示心脏、肝脏、鳃、鳍的AEAdoV相对含量较高，而黏液、皮肤和脾的病毒含量相对较低。上述结果对于研究AEAdoV的致病性，开展其流行情况和病原学情况具有重要意义。
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| 关 键 词： | 美洲鳗鲡腺瘤病毒(AEAdoV) 普通PCR 荧光定量PCR SYBR Green I 检测方法 应用 |
| 收稿时间： | 2023/7/17 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2023/10/18 0:00:00 |
Establishment and application of PCR and SYBR Green I real-time fluorescence quantitative PCR for detection of American Eel Adomavirus |
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| KONG Wendi,CHEN Xi,YANG Jinxian and GE Junqing.Establishment and application of PCR and SYBR Green I real-time fluorescence quantitative PCR for detection of American Eel Adomavirus[J].Journal of Fisheries of China,2024,48(4). |
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| Authors: | KONG Wendi CHEN Xi YANG Jinxian and GE Junqing |
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| Institution: | Institute of Biotechnology,Fujian Academy of Agricultural Sciences,Institute of Biotechnology,Fujian Academy of Agricultural Sciences,Institute of Biotechnology,Fujian Academy of Agricultural Sciences,Institute of Biotechnology,Fujian Academy of Agricultural Sciences |
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