薄壳山核桃CiSPL2基因克隆、亚细胞定位及表达分析

【目的】克隆薄壳山核桃SQUAMOSA启动子结合蛋白（SPL）转录因子基因CiSPL2，并对其进行亚细胞定位及表达分析，为探究该基因在薄壳山核桃雌花发育过程的分子机制提供理论依据。【方法】根据薄壳山核桃基因组数据，采用RT-PCR方法克隆CiSPL2基因编码区（CDS）序列，利用生物信息学软件分析其序列特征和蛋白理化性质，构建pCAMBIA1300-CiSPL2-GFP融合表达载体，瞬时转化烟草后观察荧光信号确定亚细胞定位情况。基于转录组数据和实时荧光定量PCR检测CiSPL2基因在不同组织及不同雌花芽分化时期的表达模式。【结果】薄壳山核桃CiSPL2基因CDS长度为1398 bp，共编码465个氨基酸残基，相对分子量为51.78 kD，理论等电点（p I）为8.28，不稳定系数为49.89，脂肪酸氨基酸指数为64.62，平均亲水性平均值（GRAVY）为-0.617，为不稳定的亲水性蛋白，含有SBP结构域（位于第183～257位氨基酸），亚细胞定位于细胞核。CiSPL2蛋白的二级结构主要由α-螺旋（17.42%）、延伸链（13.55%）、β-转角（1.72%）和无规则卷曲（67.31%...