| 狂犬病病毒GX074株P-MS20F突变体构建及其生长特性鉴定 |
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| 作者姓名： | 彭璟 李文芳 陆丽莹 韦显凯 李晓宁 罗廷荣 |
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| 作者单位： | 1. 广西大学动物科学技术学院;2. 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（32070161）；;广西自然科学基金项目（2020GXNSFAA297212）~~； |
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| 摘 要： | 【目的】明确狂犬病病毒(RABV)强毒株GX074的P蛋白和M蛋白第20位苯丙氨酸(Phe)替换至弱毒株r RC-HL的重组突变体在宿主细胞内的生长特性，为P蛋白和M蛋白转录复制机理研究提供理论依据。【方法】运用反向遗传技术以强毒株GX074的M蛋白第20位Phe替换弱毒株r RC-HL(GX074P)的M蛋白第20位丝氨酸(Ser)，构建r RC-HL(GX074P-MS20F)突变体感染性c DNA克隆并拯救病毒。以重组突变体感染BSR/T7-9细胞，进行多步生长曲线测定，比较重组突变体与亲本毒株的生长能力，采用Western blotting检测N蛋白、P蛋白和M蛋白相对表达水平，利用实时荧光定量PCR检测N基因、P基因和M基因的相对表达量。【结果】经RT-PCR和测序鉴定，拯救的突变体r RC-HL(GX074P-MS20F)M蛋白第20位Ser成功替换为Phe。多步生长曲线测定结果显示，构建的重组突变体在感染24、48、72和96 h后，病毒滴度均高于亲本弱毒株r RC-HL和对照弱毒株r RC-HL(GX074PM1)，平均约为亲...
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| 关 键 词： | 狂犬病病毒(RABV) P蛋白 M蛋白 生长特性 反向遗传 |
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