药用野生稻ADF基因的克隆及其抗逆性分析

为了研究ADF基因对药用野生稻非生物胁迫的影响,利用药用野生稻干旱胁迫转录组数据分析的基础,通过PCR技术克隆OoADF1基因,序列分析结果表明,OoADF1的开放阅读框长度为453 bp,无内含子,编码150个氨基酸残基,具有典型的ADF结构域。qRT-PCR技术分析表明,OoADF1在四叶期的叶片、叶鞘和根,以及抽穗期的叶片、叶鞘、茎和幼穗等7个组织中均表达,四叶期根部表达量最高,抽穗期叶鞘表达量最高。干旱和高盐胁迫后,OoADF1表达量分别上调了17.9,40.0倍。将OoADF1完整的编码序列融合到原核表达载体p ET-28a(+)中,通过IPTG诱导及SDS-PASGE检测表明,OoADF1编码的蛋白分子量约为16 kDa,与预测的相符。OoADF1在大肠杆菌中的表达增加了大肠杆菌对高盐的抗性,表明OoADF1对高盐胁迫具有一定程度的响应能力,从而使得细胞免受高盐的毒害。