| H3N2亚型猪流感病毒血凝素基因的原核表达及间接ELISA诊断方法的建立 |
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| 引用本文： | 刘天强,于海,张强,李国新,王斌,童光志. H3N2亚型猪流感病毒血凝素基因的原核表达及间接ELISA诊断方法的建立[J]. 中国预防兽医学报, 2008, 30(10) |
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| 作者姓名： | 刘天强 于海 张强 李国新 王斌 童光志 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001
2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;中国农业科学院,上海兽医研究所,上海,200232 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973计划) |
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| 摘 要： | 采用RT-PCR扩增H3N2亚型猪流感病毒HA1基因.将该片段插入到原核表达栽体pET-30a( )中,构建原核表达载体pET-HA1.阳性质粒转化宿主菌BL21,经IPTG诱导,HA1基因获得表达,其重组蛋白以包涵体的形式存在.通过改变IPTG的浓度和诱导时间,确定表达HA1基因的最佳诱导条件.Western blot分析表明表达产物具有良好的抗原活性.用纯化的表达产物作为包被抗原建立了检测H3亚型猪流感病毒抗体的间接ELISA方法,确定抗原最佳包被浓度为4 μg/mL,血清最佳稀释度为1:100,阳性标准初步判定为:待检血清OD值>0.4,而且待检血清OD值/阴性血清OD值>2.应用此方法对309份临床血清样品进行了检测,并与HT方法进行了比较,结果表明基于重组HA蛋白的间接ELISA方法可用于H3N2亚型猪流感病毒感染的初步诊断.
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| 关 键 词： | H3N2亚型猪流感病毒 血凝素基因 原核表达 |
Prokaryotic expression of swine influenza virus (H3N2) HA gene and establishment of indirect ELISA |
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| LIU Tian-qiang,YU Hai,ZHANG Qiang,LI Guo-xin,WANG Bin,TONG Guang-zhi. Prokaryotic expression of swine influenza virus (H3N2) HA gene and establishment of indirect ELISA[J]. Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine, 2008, 30(10) |
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| Authors: | LIU Tian-qiang YU Hai ZHANG Qiang LI Guo-xin WANG Bin TONG Guang-zhi |
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