| 拟南芥叶绿体发育必需蛋白PAC的原核表达及多克隆抗体制备 |
| |
| 引用本文： | 王 玥,梁 爽,梁慧珂,等.拟南芥叶绿体发育必需蛋白PAC的原核表达及多克隆抗体制备[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2016,44(10):171-175. |
| |
| 作者姓名： | 王 玥 梁 爽 梁慧珂 等 |
| |
| 作者单位： | 西北农林科技大学 生命科学学院/旱区作物逆境生物学国家重点实验室,西北农林科技大学 生命科学学院/旱区作物逆境生物学国家重点实验室,西北农林科技大学 生命科学学院/旱区作物逆境生物学国家重点实验室 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31300988）；教育部博士点基金新教师项目（20120204120036）；国家级大学生创新训练计划项目（20140712071） |
| |
| 摘 要： | 【目的】将拟南芥叶绿体发育必需蛋白PAC进行大肠杆菌原核表达和纯化,并免疫家兔,获得针对PAC蛋白的多克隆特异性抗体,为进一步研究PAC蛋白在叶绿体发育中的功能提供保证。【方法】将编码拟南芥PAC蛋白的cDNA克隆至原核表达载体pET-28a中,转化BL21(DE3)表达菌,经IPTG诱导后,对诱导产生的PAC蛋白进行镍柱亲和纯化和SDS-PAGE割胶纯化,并将纯化的PAC蛋白通过皮下注射免疫家兔,利用分离得到的抗血清,针对拟南芥野生型、PAC敲除突变系pac-1和PAC过表达系PACOE的总蛋白进行免疫印迹检测。【结果】成功构建了拟南芥基因PAC的原核表达载体pET-28a-PAC,在37℃、1mmol/L IPTG诱导4h的大肠杆菌细胞中,可检测到分子质量为38.9ku的重组蛋白,其大部分以可溶形式存在。用纯化诱导后的重组蛋白免疫家兔获得PAC抗血清,该抗血清能够有效地检测出1ng原核表达的PAC重组蛋白,并在植物样品中检测出1条分子质量约为35ku的条带。【结论】成功制备了PAC蛋白的多克隆抗体,可用于植物中PAC蛋白含量的检测。
|
| 关 键 词： | 叶绿体 PAC蛋白 原核表达 抗体制备 |
| 收稿时间： | 4/3/2015 12:00:00 AM |
Prokaryotic expression and preparation of polyclonal antibody for essential protein PAC of Arabidopsis chloroplast |
| |
| WANG Yue,LIANG Shuang and LIANG Huike,et al.Prokaryotic expression and preparation of polyclonal antibody for essential protein PAC of Arabidopsis chloroplast[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2016,44(10):171-175. |
| |
| Authors: | WANG Yue LIANG Shuang and LIANG Huike |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | chloroplast PAC protein prokaryotic expression antibody preparation |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《西北农林科技大学学报(社会科学版)》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《西北农林科技大学学报(社会科学版)》下载免费的PDF全文 |
|
