| 金鱼Tgf2转座酶的原核表达及其DNA结合活性 |
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| 引用本文： | 司蕊蕊,赵茜,卢梦琪,邹曙明,蒋霞云.金鱼Tgf2转座酶的原核表达及其DNA结合活性[J].上海海洋大学学报,2017,26(3):339-347. |
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| 作者姓名： | 司蕊蕊 赵茜 卢梦琪 邹曙明 蒋霞云 |
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| 作者单位： | 上海海洋大学 食品学院, 上海 201306,上海海洋大学 食品学院, 上海 201306,上海海洋大学 食品学院, 上海 201306,上海海洋大学 农业部种质资源与利用重点开放实验室, 上海 201306,上海海洋大学 食品学院, 上海 201306;上海海洋大学 农业部种质资源与利用重点开放实验室, 上海 201306 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31201760，31572220） |
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| 摘 要： | 金鱼Tgf2转座子基因属于Hobo/Activator/Tam3（hAT）超家族，其编码的活性转座酶能在多种鱼类转座中介导基因插入及诱变，因此在鱼类重要性状主控基因的筛选、功能解释及育种等方面具有重要的应用前景。鉴于Tgf2转座酶基因（JN886591）存在众多稀有密码子，本研究依据大肠杆菌对密码子的偏好性，对金鱼Tgf2转座酶基因进行密码子优化，所得Tgf2转座酶基因连接原核表达载体pET-28a（+），将重组载体转化到大肠杆菌BL21（DE3）细胞。该大肠杆菌细胞在培养温度37℃、OD600≈0.5时用IPTG诱导获得高效表达，即菌体中含有8.8%的重组蛋白，上清液中含有4.0%重组蛋白。采用亲和层析纯化从菌体上清液中分离得到分子量约70 ku的可溶性重组蛋白，经MALDI-（TOF）/TOF串联质谱鉴定其为重组Tgf2转座酶。进而采用分子排阻色谱法研究转座酶的DNA结合活性，结果表明：所得重组Tgf2转座酶能识别并结合含Tgf2转座子特异性亚末端重复序列的DNA探针，即启动转座。采用原核表达体系高效获得重组Tgf2转座酶，为其作为工具酶应用于鱼类生物学研究奠定必要的基础。
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| 关 键 词： | Tgf2 转座酶 原核表达 DNA结合活性 |
| 收稿时间： | 2016/10/19 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2016/12/28 0:00:00 |
Prokaryotic expression of goldfish Tgf2 transposase and its DNA binding activity |
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| SI Ruirui,ZHAO Xi,LU Mengqi,ZOU Shuming and JIANG Xiayun.Prokaryotic expression of goldfish Tgf2 transposase and its DNA binding activity[J].Journal of Shanghai Ocean University,2017,26(3):339-347. |
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| Authors: | SI Ruirui ZHAO Xi LU Mengqi ZOU Shuming and JIANG Xiayun |
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| Institution: | College of Food Science and Technology, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China,College of Food Science and Technology, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China,College of Food Science and Technology, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China,Key Laboratory of Aquatic Genetic Resources and Utilization, Ministry of Agriculture, Shanghai 201306, China and College of Food Science and Technology, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China;Key Laboratory of Aquatic Genetic Resources and Utilization, Ministry of Agriculture, Shanghai 201306, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Tgf2 transposase prokaryotic expression DNA binding activity |
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