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| 以木糖为选择标记的乳酸菌表达载体的构建及猪细小病毒VP2基因的表达 | |
| 引用本文： | 唐丽杰,欧笛,杨云清,葛俊伟,乔薪媛,姜艳萍,杨丽娟,李一经. 以木糖为选择标记的乳酸菌表达载体的构建及猪细小病毒VP2基因的表达[J]. 中国预防兽医学报, 2010, 32(6) |
| 作者姓名： | 唐丽杰 欧笛 杨云清 葛俊伟 乔薪媛 姜艳萍 杨丽娟 李一经 |
| 作者单位： | 1. 东北农业大学生命科学学院,黑龙江,哈尔滨,150030 2. 东北农业大学动物医学学院,黑龙江,哈尔滨,150030 3. 吉林省安图县畜牧兽医局,吉林,安图,133600 |
| 基金项目： | 高等学校科技创新工程重大项目培育基金项目，东北农业大学创新基金 |
| 摘 要： | 为构建以木糖为选择标记的乳酸杆菌表达载体,根据GenBank登录的E.coli JM109 xylA和xylB基因序列设计引物,以E.coli JM109基因组为模板,扩增xylAB基因,与人工合成的多克隆位点序列MCS基因、去除氯霉素基因的乳酸菌载体质粒pPG2片段及以pPG2载体质粒为模板扩增的repA基因连接,电击转化于L.casei 393感受态细胞,获得以木糖为选择标记的乳杆菌表达载体并命名为pOXM2。为鉴定pOXM2载体表达蛋白的效果,以含猪细小病毒VP2基因的重组质粒pMD-VP2为模板,扩增VP2基因序列,与载体质粒pOXM2连接,产物电击转化L.casei393感受态细胞,获得阳性克隆子pOXM2-VP2。重组菌经诱导,并进行SDS-PAGE及western blot分析。结果表明,有约180ku重组蛋白得到了表达,而且表达的重组蛋白具有与天然病毒蛋白一样的免疫反应特异性。本研究结果表明已成功构建了以木糖为选择标记的乳杆菌表达载体并实现了外源基因的表达,为进一步研究以重组干酪乳杆菌作为口服疫苗或表达功能性蛋白奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 干酪乳杆菌 食品级载体 xy1AB基因 VP2表达 |
Construction of expression vector with selection marker of xylose in lactobacillus and expression of porcine parvovirus VP2 gene |
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| TANG Li-jie,OU Di,YANG Yu-qing,GE Jun-wei,QIAO Xin-yuan,JIANG Yan-ping,YANG Li-juan,LI Yi-jing. Construction of expression vector with selection marker of xylose in lactobacillus and expression of porcine parvovirus VP2 gene[J]. Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine, 2010, 32(6) | |
| Authors: | TANG Li-jie OU Di YANG Yu-qing GE Jun-wei QIAO Xin-yuan JIANG Yan-ping YANG Li-juan LI Yi-jing |
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