| 罗非鱼链球菌双重荧光PCR方法的建立及临床应用 |
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| 引用本文： | 丁文桂,侯文婷,王自强,李永福,黄育浩,龙海鹰,李 敏,张险朋. 罗非鱼链球菌双重荧光PCR方法的建立及临床应用[J]. 中国动物检疫, 2023, 40(4): 114-122 |
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| 作者姓名： | 丁文桂 侯文婷 王自强 李永福 黄育浩 龙海鹰 李 敏 张险朋 |
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| 作者单位： | 1. 佛山科学技术学院;2. 东莞市动物疫病预防控制中心;3. 中国动物卫生与流行病学中心 |
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| 基金项目： | 东莞市2021年度省乡村振兴战略专项（20211800400112） |
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| 摘 要： | 为构建一种无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)和海豚链球菌(Streptococcus iniae)的双重荧光PCR检测方法，根据筛选的海豚链球菌LysR基因和无乳链球菌Sip基因设计特异性引物和探针，优化反应浓度和退火温度，建立标准曲线，分析方法的敏感性、特异性和重复性，最后进行方法的初步应用。结果显示：当无乳链球菌引物和探针浓度分别为0.20和0.16μmol/L，海豚链球菌引物和探针浓度分别为0.20和0.32μmol/L，且退火温度为53℃时，建立的双重荧光PCR方法荧光曲线标准，线性关系线良好，有较高的扩增反应效率；无乳链球菌和海豚链球菌最低检测限分别为29.6和10.7 CFU/mL，与猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2)和其他8种常见的水生动物疫病病原体无交叉反应，重复变异系数均小于2%；临床样品及人工污染样品检测结果与细菌分离鉴定方法符合率为100%。结果表明，本研究建立的罗非鱼链球菌双重荧光PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好，可同时对无乳链球菌和海豚链球菌进行检测，为罗非鱼链球菌病的临床诊断和研究...
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| 关 键 词： | 罗非鱼 无乳链球菌 海豚链球菌 双重荧光PCR 临床应用 |
Establishment and Clinical Application of a Duplex Fluorescent PCR Assay for Streptococcus tilapia |
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| Ding Wengui,Hou Wenting,Wang Ziqiang,Li Yongfu,Huang Yuhao,Long Haiying,Li Min,Zhang Xianpeng. Establishment and Clinical Application of a Duplex Fluorescent PCR Assay for Streptococcus tilapia[J]. China Animal Health Inspection, 2023, 40(4): 114-122 |
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| Authors: | Ding Wengui Hou Wenting Wang Ziqiang Li Yongfu Huang Yuhao Long Haiying Li Min Zhang Xianpeng |
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