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| 草酸青霉外切葡聚糖酶基因(cbh1)克隆及其在毕赤酵母中的表达和重组外切葡聚糖酶特性分析 | |
| 作者姓名： | 赵萱 顿宝庆 顾金刚 王智 田谷 许修宏 路明 李桂英 |
| 作者单位： | 1. 中国农业科学院作物科学研究所,国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程,中国农业科学院生物质能源研究中心,北京100081;东北农业大学生命科学学院,哈尔滨150030 2. 中国农业科学院作物科学研究所,国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程,中国农业科学院生物质能源研究中心,北京100081 3. 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所,中国农业微生物菌种保藏管理中心,北京100081 4. 东北农业大学生命科学学院,哈尔滨,150030 |
| 基金项目： | 国际先进农业科学与技术项目(农业部948项目)(No.2011-Z09); 农业部农村能源综合建设项目(No.2130138-018); 中国农业科学院作物科学研究所中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资助项目(No.2060302-13)共同资助 |
| 摘 要： | 木霉的纤维素酶系中通常缺少β-葡萄糖苷酶,导致了终产物抑制,木霉生长速度明显没有青霉快,因此,来源于青霉的纤维素酶受到了越来越多的重视.通过热不对称交错PCR(TAIL-PCR)技术从草酸青霉(Penicillium oxalicum)M菌株中克隆得到外切葡聚糖酶基因cbh1(GenBank登录号:HQ843504).该基因全长为1 641 bp,无内含子序列,编码547个氨基酸,具有Glu236,Asp238和Glu241典型催化残基,推测属于糖基水解酶第7家族.将cbh1克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9中,构建重组表达质粒pPIC9-cbh1,电击转入毕赤酵母(Pichia pastoris )GS 115菌株.阳性重组子经测序及活性分析表明,cbh1基因成功分泌表达,表明来源于草酸青霉的外切葡聚糖酶基因首次在毕赤酵母中获得成功表达.重组酶活性分析表明,其活性可达56IU/mg,最适反应pH、温度分别为6.0和55℃,且pH和温度稳定性均较好.研究结果认为,cbh1基因的克隆丰富了纤维素酶的基因资源,其在毕赤酵母中的成功表达也为该类纤维素酶基因高效工程菌株的构建提供了基础. |
| 关 键 词： | 外切葡聚糖酶 毕赤酵母 表达 酶学性质 |
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