| 不同孵育时间对猪精子转染外源DNA效果的影响 |
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| 引用本文： | 宋成义,周辉云,谢雨琇,李庆平,高波,王宵燕,李碧春,毛九德.不同孵育时间对猪精子转染外源DNA效果的影响[J].农业生物技术学报,2011,19(6). |
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| 作者姓名： | 宋成义 周辉云 谢雨琇 李庆平 高波 王宵燕 李碧春 毛九德 |
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| 作者单位： | 1. 扬州大学动物科学与技术学院,扬州,225009
2. 美国密苏里大学动物科学系,哥伦比亚65211,美国 |
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| 基金项目： | 国家转基因生物新品种培育重大专项(No.2009ZX08010-019B、No.2008ZX08006-005)资助 |
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| 摘 要： | 建立稳定的精子载体法技术体系对家畜的转基因育种等研究具有重要意义.为获得公猪精子与DNA最佳共孵育时间,优化建立猪精子载体法技术体系,本研究通过定量PCR、荧光显微镜检测和精液常规分析方法等,研究分析猪精子与DNA不同共孵育时间对猪精子活力、活率、DNA转染率、吸附DNA和内化DNA量的影响.结果表明,多聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)包裹的标记DNA与精子共孵育15、30、60和90 min后,随着孵育时间的延长,精子活力和活率有极显著下降(P＜0.01),而精子转染率呈极显著(P＜0.01)或显著(P＜0.05)上升,吸附外源DNA量和内化外源DNA量也呈上升趋势,但是30 min后不同孵育时间之间差异不显著(P＞0.05).此外,随着共孵育时间的延长,与精子转染率提高幅度相比,精子活力和活率的下降幅度更明显.综合考虑精子活力、活率、转染率、吸附DNA量和内化DNA量等参数,猪精子与外源DNA共孵育时间以30 min为最佳.
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| 关 键 词： | 猪 精子 DNA 孵育时间 |
The Influence of Incuabtion Time on the Transfection of Swine Sperm with Forigen DNA |
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| Song Chengyi
,
Zhou Huiyun
,
Xie Yuxiu
,
Li Qinping
,
Gao Bo
,
Wang Xiaoyan
,
LI Bichun
,
Mao Jiude.The Influence of Incuabtion Time on the Transfection of Swine Sperm with Forigen DNA[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2011,19(6). |
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| Authors: | Song Chengyi Zhou Huiyun Xie Yuxiu Li Qinping Gao Bo Wang Xiaoyan LI Bichun Mao Jiude |
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| Institution: | Song Chengyi1* Zhou Huiyun1 Xie Yuxiu1 Li Qinping1 Gao Bo1 Wang Xiaoyan1 LI Bichun1 Mao Jiude2 1 College of Animal Science & Technology,Yangzhou University,Yangzhou 225009,China,2 Department of Animal Sciences,University of Missouri,Columbia MO 65211,USA |
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| Abstract: | To obtain the optimism co-incubation time of boar sperm with DNA and set up the technique platform of swine sperm-mediated gene transfer,the Real time quantitative PCR,fluorescence microscope imaging and regular semen quality analysis were applied to detect the influence of incubation time of sperm with DNA on viability,motility,transfect efficiency,and the amount of adsorbed DNA and internalized DNA of sperm.The result revealed that,after 15,30,60,and 90 min co-incubation of the parceled and labeled DNA wi... |
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| Keywords: | Swine Sperm DNA Incubation time |
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