猪囊尾蚴API基因原核表达条件的优化 |
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引用本文: | 苏文强,胡鑫宇,王秋霞,等.猪囊尾蚴API基因原核表达条件的优化[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2017,45(8):1-6. |
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作者姓名: | 苏文强 胡鑫宇 王秋霞 等 |
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作者单位: | 河南科技学院 动物科技学院,河南科技学院 动物科技学院,河南科技学院 动物科技学院;中国农业科学院 兰州兽医研究所 |
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基金项目: | 家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金项目(SKLVEB2014KFKT007);河南科技学院高层次人才科研项目(2013008) |
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摘 要: | 【目的】获得猪囊尾蚴凋亡蛋白酶抑制剂(API)基因在大肠杆菌中的最佳表达条件,为API功能研究奠定基础。【方法】以表达载体pEGX-4T-1、pET-30a及猪囊尾蚴API基因的原核表达载体pEGX-4T-1/API-Flag、pET-30a/API为材料,对影响API蛋白表达的载体(pEGX-4T-1、pET-30a)、温度(25,30,37℃)、诱导时间(2,4,6,8h)、IPTG终浓度(0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mmol/L)和卡那霉素终浓度(100,200,300,400mmol/L)等条件进行优化,筛选重组蛋白最佳的表达条件。对在最佳条件下获取的目的蛋白进行超声处理,4℃、10 000r/min离心分别收集上清液和沉淀,对目的蛋白进行可溶性分析;SDS-PAGE后,将目的蛋白条带转印至硝酸纤维素膜上,与抗His标签抗体共孵育,检测目的蛋白的反应原性。【结果】当选择pET系列载体(pET-30a)时,API表达量高于其在pGEX系列(pGEX-4T-1)中的表达量。API融合蛋白最佳表达条件为:在含200mmol/L卡那霉素的LB培养基上于37℃培养3h后,加入终浓度为0.4mmol/L的IPTG,再于30℃诱导培养6h。SDS-PAGE结果表明,pET-30a/API融合蛋白分子质量约为53ku,与预期蛋白分子质量一致。Western-blot检测结果显示,重组蛋白pET-30a/API能够识别特异性抗体,显示获得了大量表达正确的目的蛋白。【结论】确定了API基因的最佳表达条件,获得了较大表达量的API融合蛋白。
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关 键 词: | 猪囊尾蚴 凋亡蛋白酶抑制基因 API蛋白 原核表达 |
收稿时间: | 2016/6/6 0:00:00 |
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