| 植物病毒表达载体pCIYVV／CP／W的构建及GFP表达 |
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| 引用本文： | 王振东,王晓华,孟鹏,秦会权,郑新伟,刘芳普,薛立江,张敏. 植物病毒表达载体pCIYVV／CP／W的构建及GFP表达[J]. 农业科学与技术, 2009, 10(5): 38-41,48 |
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| 作者姓名： | 王振东 王晓华 孟鹏 秦会权 郑新伟 刘芳普 薛立江 张敏 |
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| 作者单位： | [1]沈阳农业大学生物科学技术学院,辽宁沈阳110161 [2]辽宁省沈阳市农业检测中心,辽宁沈阳110034 [3]深圳市九升生物制品有限公司,广东深圳518029 |
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| 基金项目： | 辽宁省自然基金资助项目，辽宁省教育厅资助项目 |
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| 摘 要： | [目的]研究了植物病毒表达载体pCIYVV／CP／W的构建及用pClYVV／CP／W表达绿色荧光蛋白（GFP），为植物反应器生产有用蛋白、开发有效的植物病毒载体提供参考。[方法]用三叶草黄脉病毒侵染性全长cDNA克隆pCIYVV基因组的NIb／CP基因之间的一段多克隆位点和两侧含有病毒蛋白酶NIa切割识别序列的多聚脱氧核糖核苷酸接头，构建pCIYVV／CP／W载体，并将绿色荧光蛋白基因插入pCIYVV／CP／W中构建pCIYVV／CP／W／GFP载体，用反转录PCR对重组病毒克隆转录情况进行检测，并用Western杂交对重组病毒克隆表达的目的基因产物进行测定。[结果]pCIYVV／CP／W／GFP接种的蚕豆幼苗表现出与野生型CIYVV相同的症状，发病率达100％，表明重组病毒克隆pCIYVV／CP／W／GFP．有侵染性，外源基因的插入没有破坏载体pCIYVV／CP／W的开放阅读框；以感染叶总RNA为模板，对pCIYVV／CP／W／GFP表达GFP外源基因的稳定性进行了检测，从F0（重组病毒质粒最初转录出的病毒）一直检测到Fd子代病毒。检测结果表明，外源基因在L子代病毒基因组中稳定存在；以从感染叶中提取的总蛋白为抗原，以GFP抗体为第1抗体，以碱性磷酸酶标记抗体为第2抗体，用Western杂交对重组病毒克隆pCVYVV／CP／W／GFP表达外源蛋白进行了定性检测。从F0一直检测到F4子代病毒。检测结果表明，重组病毒克隆pCIYVV／CP／W／GFP至少到F4子代病毒能稳定表达GFP。
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| 关 键 词： | 植物病毒表达载体 pCIYVV／CP／W pCIYVV／CP／W／GFP 构建 表达 |
Construction of Plant Virus Expression Vector pClYVV/CP/W and Expression of GFP |
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| WANG Zhen-dong,WANG Xiao-hua,MENG Peng,QIN Hui-quan,ZHENG Xin-wei,LIU Fang-pu,XUE Li-jiang,ZHANG Min. Construction of Plant Virus Expression Vector pClYVV/CP/W and Expression of GFP[J]. Agricultural Science ＆ Technology, 2009, 10(5): 38-41,48 |
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| Authors: | WANG Zhen-dong WANG Xiao-hua MENG Peng QIN Hui-quan ZHENG Xin-wei LIU Fang-pu XUE Li-jiang ZHANG Min |
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| Affiliation: | 1. College of Bioscience and Technology, Shenyang Agricultural University, ang, Shengyang 110034; 3. Shenzheng JiuSheng Biological Products Co., Shenyang 110161 ; 2. Agricultural Detection Center of Shengy- Ltd., Shenzheng 518029) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | pClYVV/CP/W pClYVV/CP/W/GFP Plant virus expression vector pClYVV/CP/W pClYVV/CP/W/GFP Construction Expression |
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