黄鳍棘鲷血清IgM的纯化及兔抗血清的制备

分别采用Sepharose-6B凝胶过滤层析、Phenyl Sepharose FF疏水作用层析和rProtein A Sepharose亲和层析技术纯化黄鳍棘鲷（Acanthopagrus latus）血清IgM,并将这3种层析纯化方法进行了比较。纯化产物进行SDS—PAGE,电泳结果扫描后经Band Scan5．0软件分析显示,单独使用Sepharose-6B凝胶过滤层析或Phenyl Sepharose FF疏水作用层析得到的IgM纯度只有56％左右;二者联合使用纯度可以达到69％,而rProtein A Sepharose亲和层析一步就可以达到89％的纯度;纯化得到的黄鳍棘鲷血清IgM的重链和轻链分子量分别为73．6kD和26．5kD。本研究还以rProtein A Sepharose亲和层析纯化的黄鳍棘鲷血清IgM为抗原,制备其兔抗血清,采用Western Blot和双向琼脂扩散检测抗血清免疫学活性,并用间接ELISA检测其效价达到1：25600,为进一步开展黄鳍棘鲷免疫学方面的研究奠定了基础。