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H3亚型猪流感病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立
作者姓名:郭泗虎  王文华  张亮权  齐海涛  曹楠  闫明菲  黄昌力  张超轶  张桂红
作者单位:华南农业大学兽医学院农业部兽用疫苗创制重点实验室,广东广州,510642
基金项目:国家自然科学基金会(NSFC)-广东联合基金项目(U0931003);国家生猪现代农业产业技术体系(NYCYTX009)
摘    要:为建立一种快捷、可行的检测H3亚型猪流感病毒(SIV)的方法,本研究根据GenBank中登录的H3亚型SIV HA基因的保守序列,设计合成一对特异性引物,建立了一种检测H3亚型SIV的SYBR Green Ⅰ荧光定量检测方法,并进行灵敏度、稳定性和特异性试验,与普通PCR进行比较.研究结果表明,标准曲线的循环阈值与模板浓度呈现良好的线性关系,R2为0.994,CV在0.17%~1.41%之间,具有良好稳定性.除H3亚型SIV外,对H1、H4、H6、H9亚型SIV以及猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒和猪圆环病毒2型的检测均为阴性,与普通PCR相比更灵敏.该方法特异性好,准确率高,适于临床分离鉴别H3亚型SIV.

关 键 词:猪流感  H3亚型  实时荧光定量PCR
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