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低温胁迫诱导斑马鱼ZF4细胞ROS及MAPK相关蛋白表达的影响
引用本文:许琼琼,韩兵社,罗军涛,李艳,侯艳雯,胡鹏,张俊芳. 低温胁迫诱导斑马鱼ZF4细胞ROS及MAPK相关蛋白表达的影响[J]. 中国水产科学, 2016, 23(4): 771-776. DOI: 10.3724/SP.J.1118.2016.15488
作者姓名:许琼琼  韩兵社  罗军涛  李艳  侯艳雯  胡鹏  张俊芳
作者单位:省部共建水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室,上海海洋大学水产与生命学院,上海 201306
基金项目:国家自然科学基金项目(31372516);上海市自然科学基金项目(13ZR1419500);上海市教育委员会“东方学者”计划支持项目;上海市人才发展资金项目(201457)资助
摘    要:为了研究鱼类低温下分子调控机制及其与活性氧(reactive oxygen species,ROS)之间的关系,本实验对斑马鱼(Danio rerio)胚胎成纤维ZF4细胞进行不同程度的低温胁迫(18℃和10℃),监测其在不同低温胁迫时间下(1 d、3 d和5 d)ROS的变化以及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路中蛋白的表达情况。结果显示:(1)DCFH-DA探针法表明在低温胁迫作用下,细胞内ROS含量增加。细胞内ROS上升水平与外界胁迫压力成正相关。低温处理3 d后,18℃和10℃的细胞,其ROS含量与对照组(28℃)相比分别显著升高到(1.23±0.04)倍(P0.05)和(2.31±0.08)倍(P0.05)。(2)Western Blot检测磷酸化的p38(p-p38)和磷酸化的JNK(p-JNK p54和p-JNK p46)的水平变化,结果显示低温胁迫可以使p38和JNK的活性增强,且均在10℃处理3 d达到最高水平。(3)进一步检测DNA断裂标记蛋白γH2A.X的表达水平,结果显示,无论在18℃还是10℃,其在第3天呈现高表达。本实验初步证实低温胁迫能够诱导斑马鱼细胞ROS的产生;通过对不同时间点的蛋白表达水平检测,发现p-JNK、p-p38和γH2A.X激活时间点与低温诱导ROS表达时间点相吻合。该研究为后期对斑马鱼细胞低温胁迫实验奠定基础,其中低温下处理3 d可以作为一个检测各个蛋白变化的关键时间点。

关 键 词:ROS  斑马鱼ZF4细胞  低温胁迫  MAPKs  γH2A.X
修稿时间:2016-07-21

Effects of cold stress on ROS production and expression of MAPK proteins in zebrafish ZF4 cells
XU Qiongqiong,HAN Bingshe,LUO Juntao,LI Yan,HOU Yanwen,HU Peng,ZHANG Junfang. Effects of cold stress on ROS production and expression of MAPK proteins in zebrafish ZF4 cells[J]. Journal of Fishery Sciences of China, 2016, 23(4): 771-776. DOI: 10.3724/SP.J.1118.2016.15488
Authors:XU Qiongqiong  HAN Bingshe  LUO Juntao  LI Yan  HOU Yanwen  HU Peng  ZHANG Junfang
Affiliation:XU Qiongqiong;HAN Bingshe;LUO Juntao;LI Yan;HOU Yanwen;HU Peng;ZHANG Junfang;Ministry of Education;College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University;
Abstract:
Keywords:ROS  zebrafish ZF4 cells  low temperature stress  MAPKs  γH2A.X
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