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| 犬猫3种冠状病毒基因克隆的构建与芯片检测技术 | |
| 引用本文： | 李健,熊炜,陈沁,王权,王巧全,张建武,胡永强,李树清. 犬猫3种冠状病毒基因克隆的构建与芯片检测技术[J]. 中国兽医学报, 2008, 28(11) |
| 作者姓名： | 李健 熊炜 陈沁 王权 王巧全 张建武 胡永强 李树清 |
| 作者单位： | 1. 上海出入境检验检疫局,上海,200135 2. 上海大学,生命科学学院,上海,200436 3. 中国农业科学院,上海兽医研究所,上海,200032 |
| 基金项目： | 国家863计划功能基因组与生物芯片资助项目 |
| 摘 要： | 蔗糖密度梯度离心纯化浓缩犬冠状病毒(CCV)、猫冠状病毒(FCV)和猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的细胞培养物,分别设计7、17、11对引物,对病毒RNA进行反转录和PCR扩增,回收PCR产物连接pGEM-T载体并转化大肠杆菌TGI,构建35个基因片段的克隆。煮沸裂解法制备质粒DNA,回收PCR扩增产物,点制冠状病毒基因芯片。抽提病毒总RNA,利用Cy3-dCTP随机渗入反转录PCR标记,与芯片进行杂交检测,淘汰交叉的克隆片段,每种病毒只选择其4对引物克隆的基因片段。将特异克隆扩增片段重新点制基因芯片,与病毒样品PCR扩增产物杂交,未发现交叉现象。基因芯片检测比传统PCR敏感1000倍,可有效应用于3种病毒的检测与区分。 |
| 关 键 词： | 冠状病毒 克隆 基因芯片 杂交 |
Development of gene clone and diagnostic genechip for three coronaviruses in canine and feline |
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| LI Jian,XIONG Wei,CHEN Qin,WANG Quan,WANG Qiao-quan,ZHANG Jian-wu,HU Yong-qiang,LI Shu-qing. Development of gene clone and diagnostic genechip for three coronaviruses in canine and feline[J]. Chinese Journal of Veterinary Science, 2008, 28(11) | |
| Authors: | LI Jian XIONG Wei CHEN Qin WANG Quan WANG Qiao-quan ZHANG Jian-wu HU Yong-qiang LI Shu-qing |
| Abstract: | |
| Keywords: | coronavirus clone genechip hybridization |
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