| 荷斯坦奶牛IFN-α基因的克隆表达和抗病毒活性分析 |
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| 引用本文： | 汪明,史喜菊,夏春. 荷斯坦奶牛IFN-α基因的克隆表达和抗病毒活性分析[J]. 中国兽医杂志, 2004, 40(1): 13-17 |
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| 作者姓名： | 汪明 史喜菊 夏春 |
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| 作者单位： | 中国农业大学动物医学院,北京,海淀,100094 |
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| 基金项目： | 国家“十五”攻关项目 ( 2 0 0 2 BA5 14 A-16-4 ) |
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| 摘 要： | 本研究通过 PCR从荷斯坦奶牛基因组 DNA中克隆了 IFN- α(Bo IFN- α)基因 ,PCR产物双酶切后与载体 PQE30连接 ,构建重组质粒 PQE30 /Bo IFN- α,进行测序和诱导表达。测序结果表明 ,荷斯坦奶牛 IFN- α基因全长为 4 98个核苷酸 ,含一个ORF,编码 16 6个氨基酸的成熟蛋白 ,与所报道的 Bo IFN- αA亚型只存在一个点变异。表达产物经 SDS- PAGE和 Western blot分析 ,表达出 2 0 KD的融合蛋白 ,表达量占菌体总蛋白的 2 2 % ,表达产物以包涵体形式存在 ,约占沉淀蛋白的 32 %。包涵体提取物经尿素变性、透析复性后初步纯化 ,重组牛 IFN- α(r Bo IFN- α)初提物在牛肾细胞 (MDBK) /水泡性口炎病毒 (VSV)和鸡胚成纤维细胞 (CEF) /VSV细胞系上的活性分别为和 1.0～ 2 .3× 10 6 U/mg和 1.3～ 2 .6× 10 5U/mg,对传染性牛鼻气管炎病毒 (IBRV)感染有一定的抑制作用 ,抗病毒活性为 7.8× 10 5U /mg。结果显示大肠杆菌可以高效表达具有生物学活性的 r Bo IFN-α。
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| 关 键 词： | 荷斯坦奶牛 IFN—α基因 基因克隆 基因表达 抗病毒活性 干扰素 病毒性病 |
| 文章编号： | 0529-6005(2004)01-0013-04 |
Molecular cloning,expression and antiviral activity analysis of IFN-α gene of Holstein cow |
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| WANG Ming,SHI Xi-ju,XIA Chun. Molecular cloning,expression and antiviral activity analysis of IFN-α gene of Holstein cow[J]. Chinese Journal of Veterinary Medicine, 2004, 40(1): 13-17 |
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| Authors: | WANG Ming SHI Xi-ju XIA Chun |
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