| CRISPR/Cas9系统介导的人乳铁蛋白基因在山羊β-乳球蛋白基因座定点敲入 |
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| 引用本文： | 宋绍征,张婷,潘生强,陆睿,成勇,周鸣鸣.CRISPR/Cas9系统介导的人乳铁蛋白基因在山羊β-乳球蛋白基因座定点敲入[J].中国农业大学学报,2020,25(7):111-119. |
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| 作者姓名： | 宋绍征 张婷 潘生强 陆睿 成勇 周鸣鸣 |
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| 作者单位： | 无锡太湖学院 护理学院, 江苏 无锡 214000;扬州大学 兽医学院/江苏省转基因动物制药工程研究中心, 江苏 扬州 225009;江苏食品药品职业技术学院 制药工程学院, 江苏 淮安 223003 |
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| 基金项目： | 国家转基因生物新品种培育重大专项(2014ZX08008-004)；江苏省高校自然科学基金面上项目(19KJB180030)；无锡市科协软科学研究重点课题(KX-19-B28) |
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| 摘 要： | 为研究山羊乳蛋白基因编辑，实现羊乳“人源化”改造。利用CRISPR/Cas9系统敲除山羊乳中致敏原β-乳球蛋白（BLG）基因，同时在BLG基因座定点敲入人乳铁蛋白（hLF）基因。针对山羊BLG基因第一外显子设计构建sgBLG/Cas9表达载体经电转染山羊胎儿成纤维细胞验证其编辑活性；将打靶载体BLC14与sgBLG/Cas9载体共转染山羊胎儿成纤维细胞，经筛选检测获得BLG~-/hLF~+打靶细胞株作为供核细胞用于山羊体细胞核移植；通过剖宫产获取克隆胎儿并验证其中靶情况。结果表明：sgBLG/Cas9编辑山羊BLG位点致突变率约为30%～35%；共筛选72株药物抗性细胞株，其中有37株为基因打靶细胞，打靶效率为51.4%(37/72）；挑取形态较好的7株打靶细胞用于核移植，共制备416枚重构胚，移植30只受体山羊；30-35日龄B超诊断有13只受孕，妊娠率为43.3%(13/30）；剖宫产获取3只35日龄克隆胎儿均验证为BLG~-/hLF~+基因型，并建立了BLG~-/hLF~+靶向性修饰细胞系。因此，利用CRISPR/Cas9系统可以获得BLG基因座定点打靶hLF基因的转基因克隆山羊，该研究为培育羊乳中低致敏原和富含hLF功能营养成分的转基因山羊新品系提供了科学依据。
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| 关 键 词： | CRISPR/Cas9 β-乳球蛋白 人乳铁蛋白 基因打靶 核移植 |
| 收稿时间： | 2020/12/18 0:00:00 |
hLF gene knock-in at the BLG locus of goat by CRISPR/Cas9 system |
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| SONG Shaozheng,ZHANG Ting,PAN Shengqiang,LU Rui,CHENG Yong,ZHOU Mingming.hLF gene knock-in at the BLG locus of goat by CRISPR/Cas9 system[J].Journal of China Agricultural University,2020,25(7):111-119. |
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| Authors: | SONG Shaozheng ZHANG Ting PAN Shengqiang LU Rui CHENG Yong ZHOU Mingming |
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| Institution: | School of Nursing, Wuxi Taihu University, Wuxi 214000, China;College of Veterinary Medicine/Jiangsu Provincial Research Center for Animal Transgenesis and Biopharming, Yangzhou University, Yangzhou 225009, China;School of Pharmaceutical Engineering, Jiangsu Food and Pharmaceutical Science College, Huaian 223003, China |
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