黏虫溶菌酶基因Mswly的克隆与真核表达 |
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引用本文: | 张元臣,蔡新,张国强,董丽丽,王景顺.黏虫溶菌酶基因Mswly的克隆与真核表达[J].河南农业科学,2019,48(5). |
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作者姓名: | 张元臣 蔡新 张国强 董丽丽 王景顺 |
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作者单位: | 安阳工学院,河南 安阳,455000;安阳工学院,河南 安阳,455000;安阳工学院,河南 安阳,455000;安阳工学院,河南 安阳,455000;安阳工学院,河南 安阳,455000 |
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基金项目: | 安阳工学院博士科研启动基金项目;河南省自然科学基金重点项目 |
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摘 要: | 为了研究溶菌酶在害虫抵抗虫生真菌中的作用及分子机制,以黏虫为试验材料,利用RT-PCR和RACE技术获得黏虫溶菌酶基因Mswly的全长序列,同时采用体外真核表达系统对Mswly基因进行蛋白质表达。克隆、测序后分析表明,Mswly基因的cDNA全长为652 bp(GenBank登录号为MG692501),开放阅读框序列长度为426 bp,编码141个氨基酸。其编码蛋白质分子质量为16.26 ku,理论等电点为6.57;含有信号肽,剪切位点在第20个和21个氨基酸之间;含有溶菌酶活性所需要的谷氨酸和天冬氨酸活性位点。系统进化树分析表明,Mswly与其他物种的C型溶菌酶聚集在一起,说明Mswly为C型溶菌酶。Western blotting结果显示,Mswly重组蛋白大小约17 ku,与预期分子质量大小一致,说明Mswly基因在昆虫Sf9细胞系能够高效表达。综上,从黏虫脂肪体中克隆得到了1个C型溶菌酶基因Mswly的完整cDNA序列,并将其在草地贪夜蛾细胞系Sf9中进行了高效表达。
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关 键 词: | 黏虫 溶菌酶 基因克隆 RACE 系统发育 真核表达 |
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