利用CRISPR-Cas9基因编辑技术制备牛MSTN基因编辑胚胎 |
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作者姓名: | 尉翔栋 吕晨晨 朱肖亭 冯亚杰 辛晓玲 施巧婷 梁瑞清 徐照学 王二耀 滑留帅 |
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作者单位: | 河南省农业科学院 畜牧兽医研究所/河南省畜禽繁育与营养调控重点实验室,河南 郑州450002;河南农业大学 牧医工程学院,河南 郑州450002;河南省农业科学院 畜牧兽医研究所/河南省畜禽繁育与营养调控重点实验室,河南 郑州,450002;郑州外国语学校,河南 郑州,450001 |
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基金项目: | 国家肉牛牦牛产业技术体系项目;河南省肉牛产业技术体系项目;河南省农业科学院畜牧兽医研究所博士启动费项目;河南省农业科学院自主创新专项 |
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摘 要: | 为了给双肌肉牛品种的培育提供新的遗传素材,拟利用CRISPR-Cas9基因编辑技术制备牛MSTN基因编辑胚胎。从采集到的86对牛卵巢中收集卵母细胞进行成熟培养以及体外受精,并使用在线软件设计能够在体外高效编辑牛MSTN基因的gRNA序列,将验证后所得的体外切割活性最高的gRNA与Cas9 mRNA的混合物显微注射牛的受精卵,培养至囊胚后,利用T7EI核酸内切酶法检测囊胚中MSTN基因的编辑情况,然后将基因编辑阳性的囊胚样品进行测序验证。结果表明,牛胚胎体外培养平均囊胚率为21.28%;在设计的多条gRNA序列中,gRNA5的体外切割活性最高,为96.00%;将Cas9 mRNA和gRNA5的混合物显微注射受精卵并培养至囊胚后,T7EI核酸内切酶检测表明囊胚MSTN基因切割阳性率为15.40%;对MSTN基因编辑囊胚阳性样品测序表明,在gRNA5靶位点存在部分片段缺失。综上,说明利用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功获得了牛MSTN基因编辑胚胎。
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关 键 词: | 牛 MSTN基因 基因编辑 CRISPR-Cas9 胚胎 |
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