| 海岛棉纤维均一化酵母双杂交文库的构建与GbTCP5互作蛋白的筛选 |
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| 引用本文： | 郑凯,曲延英,倪志勇,蔡永生,石颖颖,陈全家.海岛棉纤维均一化酵母双杂交文库的构建与GbTCP5互作蛋白的筛选[J].核农学报,2019,33(10):1928-1939. |
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| 作者姓名： | 郑凯 曲延英 倪志勇 蔡永生 石颖颖 陈全家 |
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| 作者单位： | 新疆农业大学农学院/农业生物技术重点实验室,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐,830052;新疆农业大学农学院/农业生物技术重点实验室,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐,830052;新疆农业大学农学院/农业生物技术重点实验室,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐,830052;新疆农业大学农学院/农业生物技术重点实验室,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐,830052;新疆农业大学农学院/农业生物技术重点实验室,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐,830052;新疆农业大学农学院/农业生物技术重点实验室,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐,830052 |
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| 基金项目： | 2016年自治区研究生科研创新项目(XJGRI2016057),国家自然科学基金(31560405),新疆农业大学作物学重点学科发展基金(XNCDKY2017005) |
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| 摘 要： | 为探究转录因子在海岛棉纤维中的生物学功能,以海岛棉8个时期的纤维为研究对象,利用SMART技术合成ds-cDNA,经DSN进行均一化处理,构建以pGADT7为载体的海岛棉纤维均一化酵母cDNA文库,利用酵母双杂交系统筛选与海岛棉GbTCP5互作的蛋白。根据克隆得到的GbTCP5基因的CDS区设计含有NcoⅠ、EcoRI酶切位点的引物,构建诱饵载体pGBKT7- GbTCP5。经自激活和毒性检测后共转化酵母菌株Y2HGold,筛选与GbTCP5互作的蛋白。实时荧光定量PCR显示,GbTCP5基因在纤维发育起始期和伸长期的表达量较高,且在花瓣和花萼中的表达量高于其他组织。文库的质量检测显示,构建的均一化cDNA文库库容为9.15×107 cfu·mL-1,重组率为100%,插入片段大小在500~2 000 bp之间。诱饵载体pGBKT7-GbTCP5通过酵母双杂交系统多次筛选、回转验证,最终确定了4个互作的蛋白,分别是GbTCP20、GbTCP42、GbTCP45和GbAHP1蛋白。海岛棉纤维均一化cDNA文库的构建和筛选,为进一步研究海岛棉TCP转录因子及其互作蛋白在纤维发育时期中的作用机制奠定了基础。
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| 关 键 词： | 海岛棉 TCP cDNA文库 酵母双杂交 转录因子 |
| 收稿时间： | 2019-04-28 |
Construction of Yeast Two-hybrid Normalized cDNA Library and Screening of Interaction Proteins of GbTCP5 in Gossypium barbadense Fiber |
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| ZHENG Kai,QU Yanying,Ni Zhiyong,CAI Yongsheng,SHI Yingying,CHEN Quanjia.Construction of Yeast Two-hybrid Normalized cDNA Library and Screening of Interaction Proteins of GbTCP5 in Gossypium barbadense Fiber[J].Acta Agriculturae Nucleatae Sinica,2019,33(10):1928-1939. |
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| Authors: | ZHENG Kai QU Yanying Ni Zhiyong CAI Yongsheng SHI Yingying CHEN Quanjia |
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| Institution: | Agronomy Courtyard, Xinjiang Agricultural University/Key Laboratory of Agricultural Biological Technology, Urumqi, Xinjiang Uygur Autonomous Region 830052 |
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