黄冠梨PbpNCED3基因的克隆与表达 |
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作者姓名: | 王华 潘祺 鞠萌 汪紫萸 汪王微 王瑞生 朱立武 |
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作者单位: | 安徽农业大学园艺学院,安徽合肥,230036;安徽农业大学园艺学院,安徽合肥,230036;安徽农业大学园艺学院,安徽合肥,230036;安徽农业大学园艺学院,安徽合肥,230036;安徽农业大学园艺学院,安徽合肥,230036;安徽农业大学园艺学院,安徽合肥,230036;安徽农业大学园艺学院,安徽合肥,230036 |
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基金项目: | 国家现代农业产业技术体系建设专项(CARS-29-14);安徽省高校自然科学研究项目(KJ2016A237,KJ2016A558) |
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摘 要: | 【目的】克隆黄冠梨Pyrus bretschneideri ‘Xuehuali’×P. pyrifolia ‘Shinsseiki’叶片中的9-顺式-环氧类胡萝卜素裂解双加氧酶(NCED)基因的全长cDNA序列,研究不同程度干旱条件下该基因的表达及与叶片内源脱落酸(ABA)的动态变化关系,为明晰该基因在梨树抗旱中的分子机理提供理论依据。【方法】根据转录组数据得到的PbpNCED3序列进行同源序列扩增,通过生物信息学分析确定其属于NCED家族基因。通过酶联免疫吸附法测定不同水分条件下梨叶片内源ABA的含量,通过实时荧光定量测定Pbp NCED3基因的表达量。【结果】Pbp NCED3cDNA序列全长为1 831bp,编码603个氨基酸(GeneBank登录号为:MH749461)。该蛋白具有NCED发挥功能所依赖的4个保守的组氨酸,有NCED家族特有保守结构域序列MIAHPKxDP和HDFAITE及RPE65结构域,N-端含有靶向叶绿体的转运肽。蛋白结构预测发现,该蛋白与玉米vp14(NCED家族蛋白)比对序列相似性为70%,且具有两亲性的α螺旋结构。PbpNCED3基因的表达量与梨叶片ABA的含量成正相关关系(相关系数为0.914),且二者都受到干旱的诱导。【结论】试验所得到的黄冠梨PbpNCED3属于NCED家族基因,该基因响应干旱胁迫,其表达量与内源ABA的含量动态变化趋势一致。
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关 键 词: | 黄冠梨 NCED基因 基因克隆 脱落酸 基因表达 干旱 |
收稿时间: | 2018-08-16 |
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