菜青虫胰凝乳蛋白酶基因PrCT1的克隆及表达分析 |
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引用本文: | 张娴,李超林,郑乔木,严子成,廖海,周嘉裕.菜青虫胰凝乳蛋白酶基因PrCT1的克隆及表达分析[J].河南农业科学,2019,48(9). |
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作者姓名: | 张娴 李超林 郑乔木 严子成 廖海 周嘉裕 |
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作者单位: | 西南交通大学生命科学与工程学院,四川成都,610031;西南交通大学生命科学与工程学院,四川成都,610031;西南交通大学生命科学与工程学院,四川成都,610031;西南交通大学生命科学与工程学院,四川成都,610031;西南交通大学生命科学与工程学院,四川成都,610031;西南交通大学生命科学与工程学院,四川成都,610031 |
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基金项目: | 国家自然科学基金;四川省重点研发项目;四川省应用基础研究计划;成都市科技技术研发项目 |
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摘 要: | 胰凝乳蛋白酶是昆虫的主要消化酶,可能参与多种消化以外的生理过程。为了解该蛋白质基因表达特性,基于菜青虫(Pieris rapae)转录组数据,克隆了1个菜青虫胰凝乳蛋白酶基因PrCT1并进行相关分析。该基因编码区全长861 bp,编码286个氨基酸,含有典型的丝氨酸蛋白酶催化三联体(H_(57)、D_(102)、S_(195)),经丝氨酸蛋白酶底物特异性口袋分析,显示其属于胰凝乳蛋白酶。PrCT1与黑脉金斑蝶胰凝乳蛋白酶(GenBank登录号:OWR53227)同源性最高,达到49%,且亲缘关系最近。构建pET28a-PrCT1原核表达重组载体,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株进行原核诱导表达。结果发现,重组PrCT1蛋白以包涵体形式存在,分子质量为33.26 ku。利用实时荧光定量PCR检测菜青虫不同组织中PrCT1 mRNA表达及饥饿、决明胰蛋白酶抑制剂喂食处理后PrCT1 mRNA的表达情况显示,PrCT1基因主要在菜青虫的中肠中表达,且在饥饿、决明胰蛋白酶抑制剂喂食处理后表达水平均下调,推测PrCT1可能是菜青虫中肠中发挥食物消化作用的重要蛋白酶,且可能是重要的抗虫靶点。
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关 键 词: | 菜青虫 胰凝乳蛋白酶 克隆 原核表达 蛋白酶抑制剂 饥饿 |
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