| 一商品猪SLA-1分子复合体的体外构建 |
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| 引用本文： | 高凤山,李新生,李云岗,郝惠芳,方勤美,夏春. 一商品猪SLA-1分子复合体的体外构建[J]. 中国农业科学, 2009, 42(4). DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.04.036 |
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| 作者姓名： | 高凤山 李新生 李云岗 郝惠芳 方勤美 夏春 |
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| 作者单位： | 1. 大连大学生物工程学院,辽宁大连,116622;中国农业大学动物医学院/农业部预防兽医学重点实验室,北京,100193
2. 中国农业大学动物医学院/农业部预防兽医学重点实验室,北京,100193 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，辽宁省博士科研启动基金 |
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| 摘 要： | [目的]研究中国北方杂交商品猪SLA-I类分子结构特点,并为进一步的多肽结合等功能研究奠定基础,需要在体外构建正确折叠的SLA-I类分子复合体.[方法]以长白-达兰商品猪为研究材料,克隆SLA-2和β2m.然后采用剪接重叠延伸PCR(splicing overlap extention PCR,SOE PCR)法,将SLA-2的胞外区和β2m的成熟肽部分通过一富含甘氨酸/丝氨酸的Linker(G4S),连接,形成SLA-2-Linker-β2m全长,并插入原核表达质粒pMAL-p2X,转化E.coll TB1,IPTG诱导表达.表达得到的融合蛋白分别经过Western-blot、纯化及Factor Xa切割,分离纯化单体蛋白.圆二色谱(circular dichroism spectrum,CD)测定蛋白的二级结构.[结果]SDS-PAGE和Western-blot均证实融合蛋白MBP-SLA-I大小为84.1 kD.SLA-I单体蛋白大小为41.6 kD.圆二色谱分析单体蛋白和融合蛋白二级结构元件α-螺旋、β-折叠、转角和随机卷曲的符合率分别达到了100%、90.6%、88.5%和96.9%.[结论]结果表明重构的SLA-I复合体具有正确的二级结构,可以用于体外多肽结合等研究.
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| 关 键 词： | 复合体 圆二色谱:SLA-I |
Construction of the SLA-I Protein Complex from an Outbred Pig |
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| GAO Feng-shan,LI Xin-sheng,LI Yun-gang,HAO Hui-fang,FANG Qin-mei,XIA Chun. Construction of the SLA-I Protein Complex from an Outbred Pig[J]. Scientia Agricultura Sinica, 2009, 42(4). DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.04.036 |
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| Authors: | GAO Feng-shan LI Xin-sheng LI Yun-gang HAO Hui-fang FANG Qin-mei XIA Chun |
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