| 实时荧光PCR检测转基因大豆外源基因的拷贝数 |
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| 引用本文： | 韩强,刘瑞芳,陆玲鸿,寿惠霞.实时荧光PCR检测转基因大豆外源基因的拷贝数[J].核农学报,2016(4):646-653. |
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| 作者姓名： | 韩强 刘瑞芳 陆玲鸿 寿惠霞 |
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| 作者单位： | 浙江大学生命科学学院植物生理与生物化学国家重点实验室,浙江杭州,310058 |
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| 基金项目： | 农业部转基因生物新品种培育重大专项基金(2014ZX08004-001 |
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| 摘 要： | 快捷、准确地检测转基因植物中外源基因的拷贝数,是转基因生物育种的重要研究内容,具有较大的应用前景。本研究以7个抗虫BT(Bacillus thuringiensis)和抗草甘膦EPSPS-G10转基因大豆事件为材料,以SYBR Green I为荧光染料,利用实时荧光定量PCR方法,根据PCR反应获得的Ct值与起始模板数的对数值存在线性反比关系这一原理,建立了相关性系数在0.99以上的模板定量标线。通过目的基因与内参基因——大豆肌动蛋白编码基因ACTIN的起始模板量比较,估算出各株系的目的基因拷贝数。数据显示,株系1、2、3和4的2个基因均为单拷贝,株系6的2个基因均有2个拷贝,株系5和7的2个基因的拷贝数为3。利用Southern印迹方法对材料1~4的拷贝数进行验证,结果表明,两者的检测结果基本一致,证明实时荧光PCR检测法是大豆外源基因拷贝数检测中快速有效的方法。实时荧光PCR高效快速检测基因拷贝数,对于大规模转基因株系的外源基因拷贝数检测应用具有重大意义。
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| 关 键 词： | 实时荧光定量PCR 拷贝数 转基因大豆 Southern印迹 |
Detection of Transgene Copy Number in Transgenic Soybean by Real-time Fluorescence Quantitative PCR |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | real-time fluorescence quantitative PCR copy number transgenic soybean Southern blot |
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