| 苹果sMdCAX1基因超表达载体的构建及遗传转化 |
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| 引用本文： | 张璐,刘帅,魏萌涵,蔡斌华,王三红.苹果sMdCAX1基因超表达载体的构建及遗传转化[J].核农学报,2016(8):1460-1469. |
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| 作者姓名： | 张璐 刘帅 魏萌涵 蔡斌华 王三红 |
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| 作者单位： | 南京农业大学园艺学院/果树生物技术实验室,江苏南京,210095 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31171935);江苏省农业科技自主创新项目[CX(15)1022];中央高校基本科研业务费专项基金(KYZ201310) |
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| 摘 要： | 为使sMdCAX1基因能在苹果中高效表达,改善苹果对Ca~(2+)吸收转运的能力,本研究构建了sMdCAX1植物超表达载体并将其通过农杆菌介导法转入长富6号苹果中。根据MdCAX1基因序列设计引物,从长富6号中克隆MdCAX1基因,通过PCR方法截除编码MdCAX1基因的N末端序列,获得sMdCAX1片段。利用重叠PCR方法将sMdCAX1序列中的SacI位点进行定点突变,并在序列两端分别添加BamHI和SacI酶切位点,获得长度为1272bp的突变序列sMd1+2Mu。利用BamHI和SacI双酶切sMd1+2Mu和植物表达载体pYH4215,目的片段经回收、连接、转化和筛选,获得植物双元表达载体pYH4215-sMd1,并将该载体转化农杆菌菌株EHA105。以长富6号无菌试管苗叶片为受体,进行遗传转化获得了转基因植株,经鉴定,有6个株系呈GUS染色阳性,其中2个株系呈PCR阳性。进一步对PCR鉴定阳性的株系进行RT-PCR分析,表明sMdCAX1基因在这2个株系中得到表达。本试验结果为进一步研究苹果MdCAX1基因的功能和通过转基因方法提高苹果果实钙含量奠定了基础。
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| 关 键 词： | 苹果 sMdCAX1基因 植物超表达载体 遗传转化 |
Construction of sMdCAX1 Gene Overexpression Vector and Its Genetic Transformation in Apple |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | apple sMdCAX1 gene plant over-expression vector genetic transformation |
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