黑曲霉分泌表达载体的构建以及绿色荧光蛋白的表达 |
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作者姓名: | 郑红玉 黄毓茂 余希尧 钟泽民 项林盛 唐丽云 |
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作者单位: | 华南农业大学 兽医学院,;华南农业大学 兽医学院,;华南农业大学 兽医学院,;华南农业大学 兽医学院,;华南农业大学 兽医学院,;华南农业大学 兽医学院, |
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基金项目: | 广东省现代农业生猪产业技术体系(F10021) |
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摘 要: | 采用PCR扩增得到糖化酶基因启动子(PglaA-g)、色氨酸合成酶基因终止子(TtrpC)和潮霉素抗性筛选标记基因,依次连接这些基因元件,获得黑曲 Aspergillus niger 分泌表达载体pPHT. EGFP 基因与黑曲霉表达载体pPHT连接,得到重组表达载体pPHT-EGFP.pPHT-EGFP表达载体通过原生质体转化法转化黑曲霉,经潮霉素抗性筛选、基因组PCR鉴定阳性重组转化子.荧光显微镜观察表明,绿色荧光蛋白成功表达,而且荧光的分布具有一定的规律,主要集中在菌丝顶端、膈膜以及培养基中;固体培养基发出绿色荧光,表明绿色荧光蛋白分泌到培养基中,属于分泌性表达,蛋白分泌的部位主要位于菌丝顶端.
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关 键 词: | EGFP基因;黑曲霉;表达 |
收稿时间: | 2013-02-17 |
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