重组抗菌肽Cecropin P1在毕赤酵母X-33中的表达以及纯化后的生物活性分析 |
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引用本文: | 唐丽云,郭春和,郑红玉,项林盛,刘德辉,黄毓茂,焦茂兴. 重组抗菌肽Cecropin P1在毕赤酵母X-33中的表达以及纯化后的生物活性分析[J]. 华南农业大学学报, 2013, 34(4): 569-573 |
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作者姓名: | 唐丽云 郭春和 郑红玉 项林盛 刘德辉 黄毓茂 焦茂兴 |
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作者单位: | 1 华南农业大学 兽医学院,;2 中山大学 生命科学学院,;1 华南农业大学 兽医学院,;1 华南农业大学 兽医学院,;3 广州沃德生物技术有限公司,;1 华南农业大学 兽医学院,;4 宜春学院, |
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基金项目: | 宜春市科技创新“六个一”工程项目;广东省现代农业生猪产业技术体系(F10021);江西省教育厅科技项目(2002年) |
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摘 要: | 为了在毕赤酵母 Pichia pastoris 表达系统中表达猪源Cecropin P1并分析其生物活性,根据Cecropin P1的氨基酸序列和毕赤酵母的密码子偏嗜性设计引物,通过SOEing法合成全基因片段载入到PpicZαA质粒中,酶切线性化重组质粒PpicZαA-cecropin P1后电穿孔导入毕赤酵母X-33中进行整合,经Zection筛选和PCR检测获得高拷贝的转化子.发酵表达后将表达产物经加热预处理和Sephadex G-25层析及冻干浓缩后,Tricine-SDS-PAGE显示明亮单一条带.采用琼脂扩散法对纯化后的抗菌肽的热稳定性、酸碱稳定性、耐胰酶和胃蛋白酶稳定性进行了生物活性分析,结果表明Cecropin P1具有较强的热稳定性、酸稳定性及胃蛋白酶稳定性,但是在碱性环境下和胰酶作用下抑菌活性明显下降.
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关 键 词: | 抗菌肽;表达;纯化;生物活性 |
收稿时间: | 2013-01-10 |
Expressions of Recombinant Antimicrobial Peptide Cecropin P1 in Pichia pastoris X-33 and Biological Activity Analysis After Purification |
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Affiliation: | 1 College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University,;2 College of Life Sciences, Sun Yat-sen University,;1 College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University,;1 College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University,;3 Guangzhou Ward Biotechnology Co., Ltd.,;1 College of Veterinary Medicine, South China Agricultural University,;4 College of Yichun, |
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Abstract: | |
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Keywords: | antimicrobial peptide expression purification biological activity |
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