| 重组CRM197-4GnRH去势疫苗抗原分子的原核表达及免疫效果评价 |
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| 作者姓名： | 高华义 刘堃 张璐 王永芳 任东兴 郭钰洁 武毅 申雁冰 付旭彬 王敏 |
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| 作者单位： | 1. 天津科技大学生物工程学院;2. 天津瑞普生物技术股份有限公司;3. 天津海关动植物与食品检测中心;4. 南京农业大学动物医学院 |
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| 基金项目： | 天津市科技支撑重点项目(20YFZCSN00120)； |
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| 摘 要： | 通过大肠杆菌表达系统对CRM197-4GnRH重组去势疫苗抗原进行表达，采用不同种类佐剂制备疫苗，研究其对大鼠的免疫去势作用，为获得1种免疫效果好、有效期长、生产成本低的促性腺激素释放激素(GnRH)免疫去势基因工程疫苗提供借鉴。采用白喉毒素无毒突变体(CRM197)与4拷贝GnRH串联，将CRM197-4GnRH基因与表达载体连接，并通过优化试验确定大肠杆菌的最优表达条件，用SDS-PAGE和Western blot鉴定目标蛋白的表达情况。将融合蛋白与不同佐剂乳化，制备成9种测试疫苗后分别免疫大鼠，测定血清中GnRH抗体滴度和睾酮浓度。结果显示，重组大肠杆菌的最优表达条件为诱导时间表达5 h,培养基为LB液体培养基，IPTG诱导浓度为0.5 mmol/L;通过SDS-PAGE和Western blot试验，表明目标融合蛋白已成功表达；动物试验结果表明，重组疫苗水包油包水佐剂组、重组疫苗油包水佐剂组、GnRH+Th抗原(辅助型T细胞抗原)表位(G1抗原)油包水佐剂组测试疫苗免疫大鼠较其他组GnRH抗体滴度显著升高、睾酮浓...
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| 关 键 词： | CRM197 GnRH 大鼠 免疫去势 |
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