鸭坦布苏病毒prM蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定 |
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引用本文: | 刘亚林,梁真洁,杨兴淼,曹瑞兵.鸭坦布苏病毒prM蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定[J].畜牧与兽医,2024(1):98-106. |
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作者姓名: | 刘亚林 梁真洁 杨兴淼 曹瑞兵 |
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作者单位: | 南京农业大学动物医学院 |
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摘 要: | 为制备鸭坦布苏病毒(DTMUV)膜前体蛋白(prM)的单克隆抗体,将原核表达的重组prM蛋白配伍佐剂免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,3次免疫后分离小鼠脾细胞并将其与SP2/0细胞进行融合,通过间接ELISA筛选,获得2株能稳定分泌抗DTMUV prM蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为3H4和5C10。2株杂交瘤细胞均能稳定分泌抗体,制备的腹水抗体效价分别为1∶51 200和1∶102 400。亚型鉴定结果显示,3H4和5C10单克隆抗体的重链均属于IgG2b,轻链均为Kappa型。Western blot和间接免疫荧光试验结果显示,这2株单克隆抗体均能与BHK-21细胞中感染的DTMUV发生特异性反应,而与同属的日本脑炎病毒无交叉反应。微量病毒空斑减少中和试验结果表明,这2株单克隆抗体均具有中和活性。进一步原核表达prM蛋白不同截短体,发现2株单抗针对不同表位,均位于prM蛋白的pr片段上。本研究制备的单克隆抗体3H4和5C10为快速检测DTMUV感染和研究prM蛋白的结构与功能奠定了基础。
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关 键 词: | 鸭坦布苏病毒 prM蛋白 原核表达 单克隆抗体 B细胞表位 |
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