| 靶向敲除棉花Gh AGL16高效sg RNA的筛选 |
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| 引用本文： | 雷建峰,尤扬子,张锦恩,代培红,于莉,杜正阳,李月,刘晓东.靶向敲除棉花Gh AGL16高效sg RNA的筛选[J].中国农业科学,2024(6):1023-1033. |
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| 作者姓名： | 雷建峰 尤扬子 张锦恩 代培红 于莉 杜正阳 李月 刘晓东 |
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| 作者单位： | 1. 新疆农业大学农学院/棉花教育部工程研究中心;2. 新疆农业大学生命科学学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（32301282、32160494）；;新疆维吾尔自治区自然科学基金（2022D01B23）； |
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| 摘 要： | 【目的】AGL16是棉花MADS-box基因家族中一个重要的转录负调控因子，在抵御干旱和盐胁迫过程中发挥着重要作用。利用病毒介导的基因编辑技术（virus-induced gene editing,VIGE）筛选靶向敲除棉花GhAGL16的sgRNAs，并验证这些sgRNAs的特异性，为定向创制棉花agl16突变体奠定重要基础。【方法】根据在棉花YZ-1中A亚组和D亚组上实际克隆GhAGL16的基因组序列，预测了3个能靶向敲除GhAGL16的sgRNAs；基于棉花叶皱缩病毒（cotton leaf crumple virus,CLCrV）介导的VIGE系统，构建3个CLCrV-AtU6-26::GhAGL16-sgRNAs表达载体；利用qPCR检测Cas9超表达（Cas9over-expression,Cas9-OE）植株中Cas9的表达量，确定Cas9是否稳定遗传表达；将3个CLCrV-AtU6-26::GhAGL16-sgRNAs表达载体分别转化Cas9-OE棉花子叶，并通过PCR/RE方法检测3个靶点的突变情况；利用生物信息学方法分析3个GhAGL16-sgRNAs的二级结构；对...
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| 关 键 词： | 棉花 GhAGL16 sgRNA 突变体 VIGE 脱靶 |
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