农杆菌介导甜高粱转Bt cry1Ah的研究

 【目的】建立一套高效、稳定的甜高粱农杆菌遗传转化体系，并在甜高粱中验证来源于苏云金芽胞杆菌新型杀虫基因cry1Ah表达产物的杀虫活性。【方法】以甜高粱幼穗愈伤组织为转化受体，通过农杆菌介导法将密码子优化过的Bt cry1Ah导入2个甜高粱品种“BABUSH”和“MN-3025”中。对获得的再生植株进行PCR检测、RT-PCR分析及除草剂抗性、目的蛋白表达水平和抗虫性鉴定分析。【结果】对336块幼穗愈伤组织块进行了农杆菌侵染，经双丙氨膦（Bialaphos）梯度筛选后共获得66株再生植株，PCR鉴定在8个转化事件中有22株为阳性植株，平均转化率为2.38%。RT-PCR检测结果表明，cry1Ah在T0甜高粱转基因植株中能够正常转录。Western blotting分析和ELISA定量测定显示，有5株可检测到Bt蛋白，但Bt蛋白含量差异较大，最高可达165.69 ng?g-1叶片鲜重（FW），最低的仅为1.93 ng?g-1叶片鲜重（FW），平均为87.50 ng?g-1 FW。饲虫试验表明，有2株转基因甜高粱植株对亚洲玉米螟（Ostrinia furnacalis）表现为抗性。【结论】利用建立的以甜高粱幼穗为外植体的农杆菌遗传转化体系，可获得具有玉米螟抗性的转基因甜高粱植株，其后代遗传稳定性还有待于进一步的研究。

Introduction of Bt cry1Ah Gene into Sweet Sorghum (Sorghum bicolor L.Moench) by Agrobacterium tumefaciens-Mediated Transformation