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| 结球甘蓝雌蕊调控转录因子SPT 基因的克隆与序列分析 | |
| 引用本文： | 杨朴丽,许俊强,刘智宇,王志敏,张丹华,汤青林,宋 明. 结球甘蓝雌蕊调控转录因子SPT 基因的克隆 与序列分析[J]. 中国蔬菜, 2013, 1(20): 24-31 |
| 作者姓名： | 杨朴丽 许俊强 刘智宇 王志敏 张丹华 汤青林 宋 明 |
| 作者单位： | 西南大学园艺园林学院，南方山地园艺学教育部重点实验室，重庆市蔬菜学重点实验室，重庆;400715 |
| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划项目（2012CB113900），国家自然科学基金项目（31000908），重庆市自然科学基金项目 （2011BA1002），中央高校基本科研业务费专项（XDJK2012B020），国家大学生创新项目（201210635045） |
| 摘 要： | 以结球甘蓝E1 为材料，提取花蕾总RNA，反转录cDNA。根据拟南芥SPT 基因设计引物， 采用同源克隆的方法从中克隆SPT 基因序列1 085 bp，开放阅读框1 062 bp。通过cDNA 推导得到的氨 基酸序列分析表明，BoSPT 编码353 个氨基酸残基，预测分子量为37.67 kD，pI 为6.83。经过EcoRⅠ和 KpnⅠ限制酶双酶切后，构建原核表达质粒pET43.1a-BoSPT 转化表达菌株E. coli Rosetta（ DE3），通过 SDS-PAGE 检测该蛋白的表达。经Smart-embl 预测其具有bHLH 家族结构域，位于序列第173～221 位氨 基酸残基处。进化树表明结球甘蓝BoSPT 与拟南芥AtSPT 和筷子芥AlSPT 的亲缘关系较近。BoSPT 基因 的原核表达得到纯化的融合蛋白。 |
| 关 键 词： | 结球甘蓝 雌蕊 SPT 基因克隆 序列分析 |
Moclecular Cloning and Sequence Analysis of SPT Gene Transcription FactorRegulation of Pistil from Cabbage |
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| YANG Pu-Li,XU Jun-Qiang,LIU Zhi-Yu,WANG Zhi-Min,ZHANG Dan-Hua,TANG Qing-Lin,SONG Ming. Moclecular Cloning and Sequence Analysis of SPT Gene Transcription Factor Regulation of Pistil from Cabbage[J]. China Vegetables, 2013, 1(20): 24-31 |
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| Authors: | YANG Pu-Li XU Jun-Qiang LIU Zhi-Yu WANG Zhi-Min ZHANG Dan-Hua TANG Qing-Lin SONG Ming |
| Affiliation: | College of Horticulture and Landscape Architecture， Southwest University， Key Laboratory of Horticulture Science for;Southern Mountainous Regions， Ministry of Education， Key Laboratory of Olericulture， Chongqing 400715， China |
| Abstract: | Taking cabbage（Brassica oleracea L.） E1 as materials，We extracted total RNA from capullo，reverse transcribed cDNA. According to SPT gene sequence of Arabidopsis，primers were designed and 1 085 bp SPT gene with 1 062 bp open reading frame（ORF）was cloned by homology cloning techniques. The deduced BoSPT protein contained 353 amino acids，with a molecular weight of 37.67 kD and pI of 6.83. After double enzyme of EcoRI and KpnI restriction enzymes， and then construct the recombinant plasmids pET43.1a-BoSPT. After transformation to E. coli Rosetta（ DE3），the expression of recombinant proteins were detected via SDS-PAGE. The structural analysis of BoSPT though Smart-embl showed that it contained bHLH family domain，which located at the position of 173-221 amino acid residues，The phylogenetic tree indicated that the BoSPT had close genetic relationship with AtSPT and AlSPT. Prokaryotic expression showed that the molecular mass of BoSPT protein was purified. |
| Keywords: | Cabbage Pistil SPT Moclecular cloning Sequence analysis |
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