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番木瓜幼叶原生质体分离研究
作者姓名:唐文忠  陆国昆      黄茂康  黄伟雄  黄僚才
作者单位:(1 广西农业科学院园艺研究所 南宁 530007 2 广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室 南宁 530007 3 南宁市西乡塘区心圩街道办事处 南宁 530003 4 广西农业科学院农产品加工研究所 南宁 530007 5 南宁市老口子农林业科技有限公司 南宁 530003)
基金项目:广西自然科学基金项目(桂科自0728069);南宁市科技成果转化与产业化示范项目(200902071B)
摘    要:【目的】探讨番木瓜幼叶原生质体的最佳分离条件。【方法】以20~30日龄番木瓜无菌苗幼叶为材料,对原生质体分离过程中酶液组合、酶解时间、纯化离心速度(500~1500 rpm)及离心时间(6~10 min)进行探讨。【结果】随着酶解液中纤维素酶和果胶酶含量的提高,番木瓜原生质体产量逐渐升高,而其活力逐渐降低,其中以为2.0%纤维素酶+ 0.5%果胶酶组合的效果较好,解离时间以8 h为宜。随着酶解液中甘露醇浓度的升高,原生质体的产量呈现先增加后降低的趋势,在0.55 mol/L时达到最大(2.48×106个/gFW)。在悬浮纯化原生质体时,以1000 rpm离心6~8 min的效果较好。【结论】适宜原生质体分离的酶解液为2.0%纤维素酶+0.5%果胶酶+25 mmol/L MES+0.55 mol/L甘露醇,最适酶解时间为8 h;在原生质体纯化时,使用1000 rpm离心6~8 min,有利于获得产量及活力较高的原生质体。

关 键 词:番木瓜  幼叶  原生质体  分离
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