大果油茶基因组DNA提取及ISSR反应体系建立

【目的】建立大果油茶的ISSR-PCR适宜扩增反应体系和程序，为其深入研究奠定基础。【方法】以大果油茶嫩叶片为供试材料，采用改良的SDS法提取其基因组DNA，并对其ISSR反应体系条件进行筛选及优化。【结果】提取的基因组DNA纯度和完整性较好，OD260/OD280 值在1.8~2.0之间，DNA无降解现象，完全可以满足ISSR-PCR扩增要求。在25.0 μL ISSR-PCR反应体系中，各组分的适宜浓度配比为：40 ng/μL模板DNA 1.0 μL、2.5 mmol/L dNTPs 2.0 μL、5 U/μL TaqDNA聚合酶0.2 μL、10 μmol/L引物1.0 μL、10×PCR Buffer 2.5 μL（含有Mg 2+），加ddH2O至25.0 μL。PCR反应程序为：94℃预变性5 min；94℃变性40 s，52℃和53℃退火40 s，72℃延伸90 s，40个循环；最后72℃延伸7 min。由此可获得带型丰富和清晰可辨的DNA指纹图谱。【结论】建立的ISSR-PCR反应体系可用于研究大果油茶遗传变异和多样性。