蓝莓 Vco-miR_n10 的克隆及对干旱的响应分析

【目的】MicroRNA（miRNA）是一类内源单链非编码的小分子 RNA,在动植物中参与转录后基因表达调控。Vco-miR_n10 是蓝莓中的新型 miRNA,目前尚未见该 miRNA 功能方面的报道。本研究对蓝莓 VcomiR_n10 进行了初步功能分析。【方法】基于前期蓝莓小 RNA 高通量测序结果,对鉴定到的蓝莓新型 miRNA（Vco-miR_n10）的前体序列（224 nt）进行克隆与测序,并利用 mfold 在线软件对其前体序列的二级结构进行预测。采用 Gateway 系统构建了 35Spro:: pre-Vco-miR_n10 表达载体并转入野生型拟南芥中,对其正常生长及 300mmol/L 甘露醇处理条件下的表型进行观察与分析。【结果】克隆获得了 Vco-miR_n10 的前体序列,该序列能够折叠形成较完美的茎环结构且仅有 2 个错配碱基对。Vco-miR_n10 的成熟体序列位于 3'' 茎臂上。观察正常生长条件下的转基因植株并无显著的表型变化。而在 300 mmol/L 甘露醇模拟的干旱条件下,Vco-miR_n10-24 与 VcomiR_n10-52 的发芽率（33.53%、37.69%）和绿苗率均显著低于野生型（发芽率 67.72%、绿苗率 66.33%）。【结论】蓝莓 Vco-miR_n10 能够响应甘露醇模拟的干旱胁迫,并降低拟南芥对干旱的耐受能力,影响发芽率和绿苗率,说明蓝莓 Vco-miR_n10 可能在植物响应干旱胁迫过程中发挥一定的调控功能。

Cloning of Blueberry Vco-miR_n10 and Analysis of Its Response to Drought