| 重组鸭α-干扰素的表达与鉴定 |
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| 引用本文： | 郭艳丽,朱善元,徐佳忆,吴植,王永娟.重组鸭α-干扰素的表达与鉴定[J].中国家禽,2019(18):60-64. |
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| 作者姓名： | 郭艳丽 朱善元 徐佳忆 吴植 王永娟 |
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| 作者单位： | 南京师范大学生命科学学院;江苏农牧科技职业学院 |
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| 基金项目： | 江苏省高等学校自然科学研究重大项目（19KJA520008）;企事业单位横向合作课题（NSFPT201709、NSFPT201710）;江苏现代农业产业单项技术研发（CX(19)3005);2018年度自主创新重大项目(CX(18)1004) |
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| 摘 要： | 根据大肠杆菌密码子的偏好性,试验对GenBank中已经发表的鸭α-干扰素基因序列进行密码子优化,人工合成后构建原核表达质粒pET30a-DuIFNα-ELP;将重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达制备DuIFNα-ELP;通过SDS-PAGE切胶方法得到纯化的DuIFNα-ELP;纯化产物免疫小鼠后收获血清,用Western blotting验证免疫血清的特异性,并用ELISA法检测其特异性抗体滴度。根据类弹性蛋白多肽(ELP)温度敏感的可逆相变特性,通过重复可逆相变循环(ITC),在高盐离子浓度和临界温度下纯化重组蛋白,并采用微量细胞病变抑制法在MDCK/VSV系统中检测重组蛋白的抗病毒活性。结果表明:合成的重组鸭α-干扰素基因能成功表达,重组蛋白DuIFNα-ELP约80 ku,免疫小鼠可产生特异性抗体,抗体效价为1∶1000000。抗病毒试验检测重组DuIFNα-ELP的抗病毒活性为1.0×106U/mL,比活性为1.25×106U/mg。这一结果为研制广谱、安全、高效的基因工程鸭α-干扰素提供参考,也为检测体内外DuIFNα的表达奠定了基础。
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| 关 键 词： | 鸭 Α-干扰素 原核表达 抗体 纯化 抗病毒 |
Expression and Identification of Recombinant Duck Alpha Interferon |
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| Abstract: | GUO Yanli;ZHU Shanyuan;XU Jiayi |
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| Keywords: | |
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