| 血清3型鸭甲型肝炎病毒TaqMan RT-qPCR检测方法的建立及初步应用 |
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| 引用本文： | 范鑫,吴凤瑶,卢凤英,晁锦,张敬峰,董永毅,徐正军,索郎斯珠,张小飞. 血清3型鸭甲型肝炎病毒TaqMan RT-qPCR检测方法的建立及初步应用[J]. 中国家禽, 2019, 0(16): 34-39 |
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| 作者姓名： | 范鑫 吴凤瑶 卢凤英 晁锦 张敬峰 董永毅 徐正军 索郎斯珠 张小飞 |
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| 作者单位： | 西藏农牧学院动物科技学院;江苏省农业科学院兽医研究所;江苏省动物疫病预防控制中心 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划项目(2017YFD0500804);江苏省农业科技自主创新资金项目(CX(17)3024);江苏现代农业(水禽)产业技术体系疾病防控创新团队(JATS[2018]222) |
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| 摘 要： | 根据GenBank中已发布的血清3型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-3)基因序列,针对VP1基因序列的保守区域设计一对引物及一条特异性TaqMan探针建立了DHAV-3的TaqMan荧光定量检测方法(TaqManRT-qPCR)。通过对反应条件和反应体系的优化,建立的TaqManRT-qPCR方法在6.39×10^8~6.39×10^0拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,R2值为0.999。该方法能特异地检测出DHAV-3,与血清1型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-1)及其他常见鸭病病原无交叉反应,且组内和组间重复性试验变异系数均小于1%。用普通RT-PCR方法和建立的TaqManRT-qPCR方法,对63份临床疑似鸭肝炎的肝组织样品进行检测,结果RT-PCR方法检出DHAV-3的阳性率是34.92%(22/63),TaqManRT-qPCR方法检出的阳性率是41.27%(26/63);对49份DHAV-3感染康复鸭的肛拭子样品进行检测,RT-PCR和TaqManRT-qPCR方法检出阳性率分别为22.45%(11/49)和85.71%(42/49);用TaqManRT-qPCR方法和鸡胚半数致死量法(ELD50)对DHAV-3(SD70株)鸡胚病毒含量进行检测比较,两种方法检测结果呈正相关。结果表明所建立的TaqManRT-qPCR检测方法特异性好,灵敏度高,为DHA-3快速诊断和流行病学调查提供技术手段。
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| 关 键 词： | 血清3型鸭甲型肝炎病毒 TaqMan实时荧光定量PCR |
Establishment and Preliminary Application of TaqMan RT-qPCR for Duck Hepatitis A Virus Serotype 3 |
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| FAN Xin,WU Fengyao,LU Fengying,CHAO Jin,ZHANG Jingfeng,DONG Yongyi,XU Zhengjun,SUOLANG Sizhu,ZHANG Xiaofei. Establishment and Preliminary Application of TaqMan RT-qPCR for Duck Hepatitis A Virus Serotype 3[J]. China Poultry, 2019, 0(16): 34-39 |
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| Authors: | FAN Xin WU Fengyao LU Fengying CHAO Jin ZHANG Jingfeng DONG Yongyi XU Zhengjun SUOLANG Sizhu ZHANG Xiaofei |
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| Affiliation: | (College of Animal Science,Tibetan Agricultural and Animal Husbandry College,Linzhi,Tibet 860000;Institute of Veterinary Medicine,Jiangsu Academy of Agricultural Sciences,Nanjing,Jiangsu 210014;Jiangsu Provincial Center for Disease Control and Prevention,Nanjing,Jiangsu 210009) |
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| Abstract: | FAN Xin;WU Fengyao;LU Fengying;CHAO Jin;ZHANG Jingfeng;DONG Yongyi;XU Zhengjun;SUOLANG Sizhu;ZHANG Xiaofei(College of Animal Science,Tibetan Agricultural and Animal Husbandry College,Linzhi,Tibet 860000;Institute of Veterinary Medicine,Jiangsu Academy of Agricultural Sciences,Nanjing,Jiangsu 210014;Jiangsu Provincial Center for Disease Control and Prevention,Nanjing,Jiangsu 210009) |
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| Keywords: | duck hepatitis A virus serotype 3 TaqMan-based RT-qPCR |
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