| 猪淋巴结PKR基因的克隆与体外初步表达 |
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| 引用本文： | 孙 岩,胡 健,温俊歌. 猪淋巴结PKR基因的克隆与体外初步表达[J]. 西北农林科技大学学报(自然科学版), 2011, 39(9): 1-6 |
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| 作者姓名： | 孙 岩 胡 健 温俊歌 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 动物医学院 病毒免疫与生物信息研究室，兽医免疫学研究所农业部动物生物技术重点开放实验室，生物信息学研究中心分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组;西北农林科技大学 动物医学院 病毒免疫与生物信息研究室，兽医免疫学研究所农业部动物生物技术重点开放实验室，生物信息学研究中心分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组;西北农林科技大学 动物医学院 病毒免疫与生物信息研究室，兽医免疫学研究所农业部动物生物技术重点开放实验室，生物信息学研究中心分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(30270342，31072115) |
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| 摘 要： | 【目的】克隆猪淋巴结双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)基因,并在体外初步表达,为研究流感病毒感染时猪PKR与P58IPK在体内外的相互作用奠定基础。【方法】用Trizol法从猪淋巴结中提取总RNA,RT-PCR法扩增猪PKR基因的完整编码区,将该片段连接到原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pDsRed1-N1中,采用SDS-PAGE检测原核表达载体pGEX-PKR在大肠杆菌BL21中的表达情况,用脂质体转染法将真核表达载体pD-sRed1-PKR转入猪脐静脉血管内皮细胞系(SUVECs),Western blot检测其在细胞中的表达。【结果】PCR扩增得到了1 754bp的DNA片段,与预期结果一致;原核表达载体pGEX-PKR和真核表达载体pDsRed1-PKR经双酶切和核酸测序分析,表明载体构建成功;SDS-PAGE检测结果表明,pGEX-PKR重组质粒在大肠杆菌中成功表达;Westernblot检测到pDsRed1-PKR重组质粒在SUVECs中成功表达。【结论】成功克隆了猪淋巴结PKR基因,并在体外初步表达成功。
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| 关 键 词： | 猪PKR基因 克隆 原核表达 真核表达 |
| 收稿时间： | 2011-04-15 |
Cloning and vector construction of porcine lymph node PKR gene and its primary expression |
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| SUN Yan,HU Jian,WEN Jun-ge,GAO Yuan,BO Lian-feng, XU Zhi-kun,WU Yao-li,ZHANG De-li. Cloning and vector construction of porcine lymph node PKR gene and its primary expression[J]. Journal of Northwest A&F University（Natural Science Edition）, 2011, 39(9): 1-6 |
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| Authors: | SUN Yan HU Jian WEN Jun-ge GAO Yuan BO Lian-feng XU Zhi-kun WU Yao-li ZHANG De-li |
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| Affiliation: | SUN Yan,HU Jian,WEN Jun-ge,GAO Yuan,BO Lian-feng,XU Zhi-kun,WU Yao-li,ZHANG De-li(Investigation Group of Molecular Virology,Immunology,Oncology & Systems Biology,Center for Bioinformatics,and MOA Key Laboratory of Animal Biotechnology of National Ministry of Agriculture,Institute of Veterinary Immunology,and Research Laboratory of Virology,Immunology & Bioinformatics,Division of Veterinary Microbiology & Virology,Department of Preventive Veterinary Medicine,College of Veterinary Medicine,Northwest A&F U... |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PKR gene cloning prokaryotic expression eukaryotic expression |
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