| 胸膜肺炎放线杆菌MnmE基因突变株的构建及其生物学特性的研究 |
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| 引用本文： | 赵济钰,王璐,孙婧,王春来,李刚,刘思国.胸膜肺炎放线杆菌MnmE基因突变株的构建及其生物学特性的研究[J].中国预防兽医学报,2023(3):225-231. |
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| 作者姓名： | 赵济钰 王璐 孙婧 王春来 李刚 刘思国 |
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| 作者单位： | 1. 东北农业大学动物医学学院;2. 新疆农业大学动物医学学院;3. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31672575、32172853)； |
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| 摘 要： | 为了探究t RNA修饰酶Mnm E对胸膜肺炎放线杆菌(APP)生长特性及致病性的影响，本研究以血清7型APP S8株DNA为模板经PCR分别扩增其Mnm E基因的保守结构域及全长基因，分别构建重组质粒pmnm E及pls88-Mnm E，并经PCR鉴定正确后将重组质粒pmnm E通过接合转移方式导入受体菌S8中，利用氯霉素抗性筛选Mnm E基因缺失株(S8△Mnm E)，并经PCR和测序鉴定；将重组质粒pls88-Mnm E电转化至S8△Mnm E感受态细胞中，经卡那抗性筛选Mnm E全长基因回补株(cS8△Mnm E)，并经PCR和测序鉴定。将上述两株菌分别在无抗性培养基中传10代每代均经相应PCR鉴定其遗传稳定性。采用q RT-PCR检测Mnm E基因突变对其上下游基因转录水平的影响。结果显示，突变株S8△Mnm E和回补株cS8△Mnm E均正确构建，且遗传稳定性均较好；q RT-PCR结果显示，S8△Mnm E株Mnm E上下游基因的转录水平均与亲本株无明显差异。通过检测不同时间点的OD600nm值并绘制生长曲线分析上述两种菌与亲本株分别在20种不同氨基酸单独缺失培养基中的生长...
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| 关 键 词： | 胸膜肺炎放线杆菌 MnmE基因 基因突变株 |
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